兩株內(nèi)生真菌次級代謝產(chǎn)物的研究.pdf

1、背景：從天然產(chǎn)物中篩選生物活性成分是開發(fā)新藥的有效途徑之一，但是從藥用植物中發(fā)現(xiàn)活性化合物的幾率一直在降低。而植物內(nèi)生真菌與宿主植物可能產(chǎn)生類似活性化合物，且種類繁多，具有巨大的開發(fā)潛力。因此，從可持續(xù)發(fā)展的層面上看，從植物內(nèi)生真菌的代謝產(chǎn)物中尋找活性化合物是開發(fā)新藥的一條有效的途徑。冬凌草系唇形科香茶菜屬多年生草本植物碎米椏(Rabdosia rubescens)的干燥地上部分，主要化學(xué)成分包括貝殼杉烷二萜類、黃酮類、揮發(fā)油及多糖類等

2、，其中以冬凌草甲素為代表的二萜類化合物對食管癌、結(jié)腸癌、賁門癌均有一定療效。我們將河南道地藥材冬凌草作為研究對象，對其內(nèi)生真菌進行分離純化得到球毛殼菌。球毛殼菌經(jīng)過發(fā)酵的次級代謝產(chǎn)物乙醇提取物有一定的抗癌活性。且文獻報道的從球毛殼菌次級代謝產(chǎn)物里分離出的化合物已達200多個，具有不同程度的抗菌抗癌活性。因此我們選取冬凌草內(nèi)生真菌中的球毛殼菌進行研究以期發(fā)現(xiàn)具有抗腫瘤活性的化學(xué)成分。
　　紅樹林(Mangrove)，查閱文獻報道表明

3、，擴展青霉菌(Penicillium expansum)次級代謝產(chǎn)物中所分離得到的倍半萜類化合物和苯酚三聚體類化合物，具有良好的逆轉(zhuǎn)多藥耐藥及細胞毒活性。因此我們選取擴展青霉菌進行發(fā)酵以期從次級代謝產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)具有抗腫瘤活性的化學(xué)成分。
　　目的意義：本文分別對球毛殼菌(chaetomium globosum)和擴展青霉菌(Penicillium expansum)的次級代謝產(chǎn)物進行化學(xué)成分研究，以期得到具有較好抗癌活性和抗菌活性且

4、結(jié)構(gòu)新穎的單體化合物，這對發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)新穎生物活性化合物以及對植物內(nèi)生真菌的研究具有一定意義。
　　方法：本文分別采用固體和液體發(fā)酵法對球毛殼菌(chaetomium globosum)和擴展青霉菌(Penicillium expansum)進行發(fā)酵，發(fā)酵所得次級代謝產(chǎn)物用正相硅膠柱、MCI、大孔吸附樹脂、HPLC和SephadexLH-20等方法進行化學(xué)成分的分離和純化，通過IR，UV，1H-NMR，13C-NMR等現(xiàn)代技術(shù)對所分離

5、得到的單體化合物進行鑒定并確認結(jié)構(gòu)。用MTT法對經(jīng)分離鑒定的化合物進行抗癌活性測定。用紙片法、倍比稀釋法和瓊脂稀釋法進行抗菌活性研究。
　　結(jié)論：（1）從冬凌草(Rabdosia rubescens)內(nèi)分離出16種內(nèi)生真菌，其中1-8號菌屬于暗孢科，9號菌、10號菌屬于瘤座孢菌科，11號菌屬于炭棒科，12號菌屬于黑盤孢菌科，13號菌、14號菌屬于球殼孢菌科，15號菌屬于鮮殼孢菌科，16號菌屬于半殼孢菌科。針對 PC-3（前列腺癌細

6、胞）、MGC-803（胃癌細胞）對其發(fā)酵粗提物進行抗癌活性測試，5號菌和9號菌的發(fā)酵粗體物對PC-3的IC50分別為302μg/ml,136μg/ml，11號菌和15號菌的發(fā)酵粗體物對MGC-803的IC50值分別為181μg/ml,123μg/ml。
　　（2）從球毛殼菌(chaetomium globosum)的次級代謝產(chǎn)物中分離鑒定出10個單體化合物，分別鑒定為：stigmasta-4,6,8(14),22-tetraen-

7、3-one（1）、4-methyl-5,6-dihydro-2H-pyran-2-one（2）、(E)-6-hydroaxy-4,6-dimethyl-3-heptene-2-one（3）、glyceroyl monopaimitate（4）、、4-羥基-2′-脫氧嘧啶核苷（5）、胞腺嘧啶脫氧核苷（6）、麥角甾醇過氧化物（7）、bungein A（8）、β-谷甾醇（9）、鄰苯二甲酸二丁酯（10）。
　?。?）從擴展青霉菌(Peni

8、cillium expansum)的次級代謝產(chǎn)物中分離得到10個化合物，過氧麥角甾醇（11）、環(huán)（甘氨酸-亮氨酸）（12）、anthraquinone aversin（13）、5-methoxysterigmatocystin（14）、6,8-di-O-methyl averufin(15)、環(huán)（甘-苯丙）二肽（16）、環(huán)（L-苯丙-反-4-羥基-L-脯）二肽（17）、Brevianamide K（18） Brevianamides Q