兩株南極海洋真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究.pdf

1、極地自然環(huán)境條件苛刻惡劣，具有嚴(yán)寒、強(qiáng)風(fēng)、強(qiáng)紫外輻射等特點(diǎn)，因而高等動(dòng)植物罕見(jiàn)，微生物如細(xì)菌、真菌、放線菌等資源豐富多樣。為了適應(yīng)極地特殊的自然生態(tài)環(huán)境，極地微生物在基因組成與表達(dá)、酶學(xué)及相關(guān)代謝調(diào)控方面形成獨(dú)特的分子生物學(xué)特性，因而可產(chǎn)生結(jié)構(gòu)新穎、活性獨(dú)特的次級(jí)代謝產(chǎn)物，并具有豐富的生物學(xué)活性，如抗腫瘤、抗菌活性等，可成為新型化學(xué)藥物的重要來(lái)源。
　　在本課題組前期研究中，采用PTP1B抑制活性為指征及TLC香蘭素顯色分析方法篩

2、選得到真菌Penicillium sp.S-1-18。采用含0.3％酵母提取粉，0.5％胰蛋白胨，0.3％麥芽糖，1％葡萄糖及5％蔗糖的培養(yǎng)基，在初始pH7.0，18℃，180 r/min的條件下培養(yǎng)14d，發(fā)酵結(jié)束后濾出菌體，菌液部分濃縮并用乙酸丁酯萃取，最終得到總浸膏約60 g。在此基礎(chǔ)上展開(kāi)對(duì)代謝產(chǎn)物的鑒定和生物學(xué)活性研究。首先采用石油醚和二氯甲烷對(duì)總浸膏進(jìn)行分步萃取，進(jìn)而對(duì)二氯甲烷相浸膏進(jìn)行系統(tǒng)分離純化，分別采用減壓柱層析、Se

3、phadex LH20凝膠柱層析、反相ODS柱層析、正相硅膠柱層析及高效液相等色譜分析方法，最終分離得到9個(gè)化合物，分別是butanolide A(1)，guignarderemophilane F(2)，xylarenone A(3)，penicyclone A(4)，4(3H)-喹唑啉酮(5)，環(huán)-(L-脯氨酸-L-苯丙氨酸）(6)，環(huán)-(L-脯氨酸-4R-羥基-L-脯氨酸)(7)，callyspongidipeptide A(8)

4、和N-(2-羥基丙酸)-2-氨基苯甲酸(9)。其中化合物1和2為新化合物，其絕對(duì)構(gòu)型分別通過(guò)改良的Mosher法和ECD/CD比對(duì)法進(jìn)行了確定。對(duì)該菌株中所得化合物進(jìn)行生物學(xué)活性評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示化合物1有一定的PTP1B抑制活性，其IC50為27.4μM，此外化合物4、5和8有微弱的抑制鮑曼不動(dòng)桿菌活性，IC50值均為64μM。
　　與此同時(shí)，采用TLC顯色指征法篩選出一株南極海洋來(lái)源真菌Penicillium sp.S-2-10。

5、以TLC顯色及產(chǎn)物浸膏量為參考，對(duì)其發(fā)酵條件進(jìn)行初步優(yōu)化，最終確定選用含1.0％NaCl的GPY培養(yǎng)基，在24℃，180 r·min-1條件下振蕩培養(yǎng)12 d進(jìn)行規(guī)模發(fā)酵。發(fā)酵90 L后用紗布過(guò)濾菌體和菌液，用二氯甲烷與甲醇等體積萃取菌體，用乙酸乙酯萃取菌液，合并萃取液濃縮得到約16 g總浸膏。采用Sephadex LH20凝膠柱層析、正相硅膠柱層析、反相ODS柱層析及高效液相等色譜分析方法對(duì)總浸膏進(jìn)行系統(tǒng)分離純化，通過(guò)核磁（1H-NM

6、R和13C-NMR等）及質(zhì)譜(MS)等波譜分析方法，并與相關(guān)文獻(xiàn)比較，確定了7個(gè)化合物結(jié)構(gòu)，分別為benzoic acid,2-(2,6-dihydroxybenzoyl)-3-hydroxy-5-(hydroxymethyl)-methyl，methyl ester(10)，大黃酚(11),volemolide(12),ergosta-6,8(14),22-trien-3-ol(13),2-aminophenoxazin-3-one(