十種植物內(nèi)生真菌的分離及其次級代謝產(chǎn)物生物活性研究.pdf

1、植物內(nèi)生真菌可產(chǎn)生與宿主相同或者相似化學結構的物質(zhì)，并且具有良好的生物活性，已經(jīng)成為發(fā)現(xiàn)新型天然產(chǎn)物的重要資源。本論文對十種植物紫菀（Aster tataricus）、馬錢子（Strychnos mux）、烏頭（Aconitum carmichaeli）、甘肅馬仙蒿（Pedicularis kansuensis）、粗齒鐵線蓮（Clematis argentilucida）、蓖苞風毛菊（Saussurea pectinata）、老鸛草（G

2、eranium sinense）、曲花紫堇（Corydalis curviflora）、松潘烏頭（Aconitum sungpanense）、一把傘南星（Arisaema erubescens）中的內(nèi)生真菌進行了分離與純化，并對其發(fā)酵粗提物生物活性進行了研究。另外，對課題組前期發(fā)現(xiàn)的一株雷公藤中的內(nèi)生真菌（Talaromycessp. LGT-2）的化學成分及其生物活性進行了研究。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴十種植物內(nèi)生真菌的分離

3、均采用植物組織切塊法和劃線分離法，從十種植物中共得到73株內(nèi)生真菌，其中從紫菀中分離到6株，從馬錢子中分離到7株，從烏頭中分離到7株，從甘肅馬仙蒿中分離到4株，從粗齒鐵線蓮中分離到6株，從蓖苞風毛菊中分離到12株，從老鸛草中分離到7株，從曲花紫堇中分離到7株，從松潘烏頭中分離到7株，從一把傘南星中分離到10株。對73株內(nèi)生真菌進行了發(fā)酵，共獲得菌液乙酸乙酯萃取物和菌絲體甲醇提取物146個。⑴利用酶標法及改良的Ellman法，對146個樣

4、品進行了單胺氧化酶(MAO)及乙酰膽堿酯酶(AchE)抑制活性測定，實驗發(fā)現(xiàn)16個內(nèi)生真菌提取物具有較強的單胺氧化酶抑制活性，但所有提取物乙酰膽堿酯酶抑制活性均較弱，其中從紫苑中分離得到的菌株JK-1菌液及菌絲體提取物的單胺氧化酶抑制活性最強，其 IC50分別為3.13μg/mL、7.70μg/mL。⑶對課題組前期發(fā)現(xiàn)的一株從雷公藤中分離的能產(chǎn)生新環(huán)肽類化合物的內(nèi)生菌Talaromycessp. LGT-2（GeneBank收錄號為：K

5、F934203）進行了大批量發(fā)酵（50L），得到了次級代謝產(chǎn)物提取物。利用多種色譜（硅膠柱色譜法，薄層色譜法，LH-20葡聚糖凝膠色譜法，HPLC色譜法等）分離技術及光譜分析技術對粗提物化學成分進行分離及鑒定，并對單體化合物單胺氧化酶抑制活性、乙酰膽堿酯酶抑制活性、抗菌及抗腫瘤等生物活性進行了研究。本實驗共分離得到16個單體化合物，它們被鑒定為fumitremorgin C(1)、brevianamide F(2)、pseurotin

6、A1(3)、pseurotin A2(4)、spirotryprostatin A(5)、6-Methoxyspirotryprostatin B(6)、3-Dehydroxymethylbisdethio-3，10a-bis(methylthio)gliotoxin(7)、bisdethiobis(methylthio)gliotoxin(8)、didehydrobisdethiobis(methylthio)gliotoxin(9)

7、、cyclosieversioside F(10)、(Z)-N-(4-hydroxystyryl)formamide(11)、ergosterolperoxide（12）、ergosterol（13）、4，6，8(14)，22(23)-tetraen-3-one-ergostane（14）、physcion（15）、chrysophanol（16）。其中化合物11顯示了中等強度的單胺氧化酶抑制活性，其IC50為61μmol/L；化合物3