高效液相色譜法在幾種藥用植物分析中的應(yīng)用研究.pdf

1、中醫(yī)藥是我國傳統(tǒng)醫(yī)學的瑰寶，在長達五千年的不斷發(fā)展應(yīng)用中得到了我國人民的廣泛認可與接受。隨著歷史的推移中藥在國際上也產(chǎn)生了較大的影響，亞洲許多國家把中藥當作提高健康的重要工具，歐美等發(fā)達國家也越來越重視天然藥物與傳統(tǒng)醫(yī)學的作用。中藥活性成分的分離純化和分析是中藥現(xiàn)代化的重要組成部分，但是中藥是一個典型的復雜未知樣品，其化學物質(zhì)基礎(chǔ)的闡明是中藥現(xiàn)代化的關(guān)鍵科學問題之一。液相色譜是中藥分析中應(yīng)用最普遍的技術(shù)，也是進一步與質(zhì)譜、核磁共振等聯(lián)用

2、的基本分離手段。因此，如何在色譜理論的基礎(chǔ)上，建立系統(tǒng)的、快速的中藥液相色譜分析方法發(fā)展的平臺越來越被人們所重視，這在中藥化學物質(zhì)基礎(chǔ)研究中起到非常重要的作用。本論文在前人的工作基礎(chǔ)上，主要開展了以下幾方面的研究工作： (1)首次建立了同時測定蜂膠液中六種有機酸的高效液相色譜測定方法，為蜂膠液中有機酸類物質(zhì)的測定提供方法依據(jù)，對蜂膠相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量鑒定標準進行了補充。 (2)采用反相高效液相色譜法同時對桑葉和柘葉中的四種植

3、物次生代謝物質(zhì)(綠原酸、對羥基苯甲酸、苯酚和香豆素)進行分離測定，首次研究探討了桑樹葉和柘樹葉中的次生代謝物質(zhì)在種類和含量等方面存在的差異。 (3)采用各種分離純化技術(shù)得到苦楝果實中的苦楝素，并建立了高效液相色譜熒光檢測法測定苦楝果實中苦楝素的新方法。結(jié)果表明，該法簡便、快速、靈敏、重現(xiàn)性好。 (4)建立了炮制前后決明子藥材的HPLC指紋圖譜，為研究炮制前后決明子藥材的質(zhì)量變化、保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性提供一定的依據(jù)。

4、 本論文共分為五章。 第一章：緒論部分從高效液相色譜的特點、色譜技術(shù)方面的進展以及在中草藥研究中的應(yīng)用幾個方面詳細介紹了HPLC分析技術(shù)的研究進展與應(yīng)用現(xiàn)狀。 第二章：建立了蜂膠中6種有機酸的高效液相色譜測定方法。固定相為EclipseXDB-C18柱(4.6 mm×150 mm；5μm)，流動相為乙腈-0.4％的冰醋酸溶液(30：70，V/V，pH2.9)，流速0.8 mL/min，柱溫28℃。采用設(shè)定波長程序的方法

5、進行檢測，樣品中6種組分的加標回收率在89.35％～104.5％之間，綠原酸、咖啡酸、香草酸、阿魏酸、苯甲酸、肉桂酸的線性范圍分別為0.022～44、0.025～50、0.029～58、0.022～44、0.0414～62.1、0.0444～66.6μg/mL，檢測限分別為4.55、3.95、8.7、6.29、10.35、3.92 ng/mL，相對標準偏差小于3％。該法簡便、快速、靈敏，可用于蜂膠中6種有機酸的同時分離測定。 第

6、三章：建立了一種同時測定四種植物次生代謝物的反相高效液相色譜法。采用Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6mm，5μm)色譜柱，以甲醇-水(0.1％H3PO4pH為3.5)(30：70，V/V)為流動相，采用梯度洗脫，柱溫為20℃，檢測波長為λ1=325nm；λ2=254 nm；λ3=218nm。綠原酸、對羥基苯甲酸、苯酚和香豆素的線性范圍分別為440～1.35、400～1.25、960～3.00、400～1.25 mg/

7、L，相關(guān)系數(shù)均大于0.999。檢測限分別為0.27、0.25、0.60、0.25 mg/L。該方法靈敏快速，結(jié)果可靠，重現(xiàn)性好，可用于桑葉和柘葉中這四種化合物的分離測定。 第四章：建立了一種快速、有效的高效液相色譜熒光檢測法測定苦楝果實中苦楝素的新方法?？嚅麑嵲辖?jīng)過一系列的提取和純化步驟后，再進行分析測定。采用Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm；5μm)，流動相組成為甲醇-水，采用梯度洗脫，流速為1

8、.0 mL/min，柱溫25℃，檢測波長為Eb=230 nm，Em=320nm。樣品加標回收率為98.4％～101.5％，峰面積的相對標準偏差低于3.0％。檢測限為4.68μg/mL，苦楝素的線性范圍為7.625-610.0μg/mL。與此同時，對收集到的苦楝素組分采用紅處光譜和質(zhì)譜手段進行了表征。該方法可以成功地用于苦楝果實中苦楝素的分析測定，結(jié)果令人滿意。 第五章：采用高效液相色譜法研究并建立了炮制前后決明子藥材的指紋圖譜。