高效液相色譜法習(xí)題答案

1、1第二十章高效液相色譜法思考題和習(xí)題1簡(jiǎn)述高效液相色譜法和氣相色譜法的主要異同點(diǎn)。相同點(diǎn)：均為高效、高速、高選擇性的色譜方法，兼具分離和分析功能，均可以在線檢測(cè)不同點(diǎn)：分析對(duì)象及范圍流動(dòng)相的選擇操作條件GC能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點(diǎn)較低的樣品，占有機(jī)物的20%流動(dòng)相為有限的幾種“惰性”氣體，只起運(yùn)載作用，對(duì)組分作用小加溫常壓操作HPLC溶解后能制成溶液的樣品，高沸點(diǎn)、高分子量、難氣化、離子型的穩(wěn)定或不穩(wěn)定化合物，占有機(jī)物的80%流動(dòng)相為

2、液體或各種液體的混合。它除了起運(yùn)載作用外，還可通過(guò)溶劑來(lái)控制和改進(jìn)分離。室溫、高壓下進(jìn)行2何謂化學(xué)鍵合相？常用的化學(xué)鍵合相有哪幾種類型？分別用于哪些液相色譜法中？采用化學(xué)反應(yīng)的方法將固定液鍵合在載體表面上，所形成的填料稱為化學(xué)鍵合相。優(yōu)點(diǎn)是使用過(guò)程不流失，化學(xué)性能穩(wěn)定，熱穩(wěn)定性好，適于作梯度淋洗。目前常用的SiOSiC型鍵合相，按極性分為非極性，中等極性與極性三類。①非極性鍵合相：常見(jiàn)如ODS鍵合相，既有分配又有吸附作用，用途非常廣泛，

3、用于分析非極性或弱極性化合物；②中等圾性鍵合相：常見(jiàn)的有醚基鍵合相，這種鍵合相可作正相或反相色譜的固定相，視流動(dòng)相的極性而定：③極性鍵合相：常用氨基、氰基鍵合相，用作正相色譜的固定相，氨基鍵合相還是分離糖類最常用的固定相。3什么叫正相色譜？什么叫反相色譜？各適用于分離哪些化合物？正相色譜法：流動(dòng)相極性小于固定相極性的色譜法。用于分離溶于有機(jī)溶劑的極性及中等極性的分子型物質(zhì)，用于含有不同官能團(tuán)物質(zhì)的分離。反相色譜法：流動(dòng)相極性大于固定相極

4、性的色譜法。用于分離非極性至中等極性的分子型化合物。4簡(jiǎn)述反相鍵合相色譜法的分離機(jī)制。典型的反相鍵合色譜法是用非極性固定相和極性流動(dòng)相組成的色譜體系。固定相，常用十八烷基（ODS或C18）鍵合相；流動(dòng)相常用甲醇水或乙腈水。非典型反相色譜系統(tǒng)，用弱極性或中等極性的鍵合相和極性大于固定相的流動(dòng)相組成。反相鍵合相表面具有非極性烷基官能團(tuán)，及未被取代的硅醇基。硅醇基具有吸附性能，剩余硅醇基的多寡，視覆蓋率而定。對(duì)于反相色譜的分離機(jī)制目前，保留

5、機(jī)制還沒(méi)有一致的看法，大致有兩種觀點(diǎn)，一種認(rèn)為屬于分配色譜，另一種認(rèn)為屬于吸附色譜。分配色譜的作用機(jī)制是假設(shè)混合溶劑（水十有機(jī)溶劑）中極性弱的有機(jī)溶劑吸附于非極性烷基配合基表面，組分分子在流動(dòng)相中與被非極性烷基配合基所吸附的液相中進(jìn)行分配。吸附色譜的作用機(jī)制可用疏溶劑理論來(lái)解釋。這種理論把非極性的烷基鍵合相，看作是在硅膠表面上覆蓋了一層鍵合的十八烷基的“分子毛“，這種“分子毛有強(qiáng)的疏水特性。當(dāng)用水與有機(jī)溶劑所組成的極性溶劑為流動(dòng)相來(lái)分離

6、有機(jī)化合物時(shí)，一方面，非極性組分分子或組分分子的非極性部分，由于疏溶劑作用，將會(huì)從水中被＂擠＂出來(lái)，與固定相上的疏水烷基之間產(chǎn)生締合作用，其結(jié)果使組分分子在固定相得到保留。另一方面，被分離物的極性部分受到極性流動(dòng)相的作用，使它離開固定相，減小保留值，此即解締過(guò)程，顯然，這兩種作用力之差，決定了分子在色譜中的保留行為。一般說(shuō)來(lái)，固定相上的烷基配合基或被分離分子中非極3(3)流速流速大于0.5cms時(shí)，H～u曲線是一段斜率不大的直線。降低流

7、速，柱效提高不是很大。但在實(shí)際操作中，流量仍是一個(gè)調(diào)整分離度和出峰時(shí)間的重要可選擇參數(shù)。9試討論反相HPLC的分離條件的選擇。反相HPLC法是以表面非極性載體為固定相，以比固定相極性強(qiáng)的溶劑為流動(dòng)相的—種液相色譜分離模式。反相HPLC色譜中樣品的保留值主要由固定相比表面積、鍵合相種類和濃度決定，保留值通常隨鏈長(zhǎng)增長(zhǎng)或鍵合相的疏水性增強(qiáng)而增。溶質(zhì)保留值與固定相表面積成正比，當(dāng)其他條件相同時(shí)，溶質(zhì)在低表面積色譜柱上的保留值短。樣品的保留值也

8、可以通過(guò)改變流動(dòng)相組成或溶劑強(qiáng)度來(lái)調(diào)整，溶劑強(qiáng)度取決于有機(jī)溶劑的性質(zhì)和其在流動(dòng)相中的濃度。10在正、反相HPLC中流動(dòng)相的強(qiáng)度是否相同？在正相色譜中，由于固定相是極性的，所以溶劑極性越強(qiáng)，洗脫能力也越強(qiáng)，即極性強(qiáng)的溶劑是強(qiáng)溶劑。在反相色譜中，由于固定相是非極性的，所以溶劑的強(qiáng)度隨溶劑的極性降低而增加，即極性弱的溶劑是強(qiáng)溶劑。11什么叫梯度洗脫？它與GC的程序升溫有何異同？在一個(gè)分析周期內(nèi)，按一定程序不斷改變流動(dòng)相的組成或濃度配比，稱為梯

9、度洗提。是改進(jìn)液相色譜分離的重要手段。梯度洗提與氣相色譜中的程序升溫類似，但是前者連續(xù)改變的是流動(dòng)相的極性、pH或離子強(qiáng)度，而后者改變的溫度。程序升溫也是改進(jìn)氣相色譜分離的重要手段。12蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的原理及特點(diǎn)是什么？蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（EvapativeLightscatteringDetect）是通用型檢測(cè)器，可以檢測(cè)沒(méi)有紫外吸收的有機(jī)物質(zhì)，如人參皂苷、黃芪甲苷等。一、ELSD原理恒定流速的色譜儀（高效液相、逆流色譜、高效毛細(xì)管電

10、泳等）洗脫液進(jìn)入檢測(cè)器后，首先被高壓氣流霧化，霧化形成的小液滴進(jìn)入蒸發(fā)室(漂移管，drifttube)，流動(dòng)相及低沸點(diǎn)的組分被蒸發(fā)，剩下高沸點(diǎn)組分的小液滴進(jìn)入散射池，光束穿過(guò)散射池時(shí)被散射，散射光被光電管接收形成電信號(hào)，電信號(hào)通過(guò)放大電路、模數(shù)轉(zhuǎn)換電路、計(jì)算機(jī)成為色譜工作站的數(shù)字信號(hào)——色譜圖。二、特點(diǎn)1洗脫液需要霧化，所以霧化氣流的純度和壓力會(huì)影響檢測(cè)器的信噪比。2流動(dòng)相要蒸發(fā)掉，所以不能使用不易揮發(fā)的物質(zhì)來(lái)調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值?？梢酝?/p>

11、過(guò)蒸發(fā)溫度的調(diào)節(jié)來(lái)使比被測(cè)物質(zhì)沸點(diǎn)低的組分蒸發(fā)。在不使被測(cè)物質(zhì)蒸發(fā)的前提下，溫度越高，流動(dòng)相蒸發(fā)越完全，色譜圖基線越好、信噪比越高。如果被測(cè)物質(zhì)沸點(diǎn)接近或低于流動(dòng)相的蒸發(fā)溫度，則無(wú)法檢測(cè)；不過(guò)，100%的水做流動(dòng)相，蒸發(fā)室溫度也才設(shè)為150攝氏度，沸點(diǎn)比水低的有機(jī)物質(zhì)完全可以用氣相色譜儀進(jìn)行分離檢測(cè)了。由于流動(dòng)相和溶劑蒸發(fā)了，使用ELSD檢測(cè)器收集的色譜圖一般沒(méi)有溶劑峰；而且梯度洗脫沒(méi)有折光視差效應(yīng)，一般不會(huì)出現(xiàn)基線漂移。3.檢測(cè)光散射