高效液相色譜法剖析

1、高效液相色譜法在藥物分析中的研究進展,匯報人：李巧榮 2016.12.19,主要內容 1.簡介 2.高效液相色譜法在藥物分析中的應用 3.高效液相色譜法在藥物監(jiān)測中的應用 4.高效液相色譜法在藥代動力學中的研究 5.高效液相色譜法未來的發(fā)展方向 6. 參考文獻 7.本綜述討論提綱,1.

2、 簡介,高效液相色譜法 （HPLC）又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。該方法已成為化學、醫(yī)學、工業(yè)、農學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術。HPLC在國內和國外的藥物分

3、析領域的應用范圍很廣，發(fā)展速度也很快，尤其在我國，近十幾年來HPLC方法越來越受到重視。尤其在藥物分析應用方面，高效液相色譜法有著不可替代的作用，它對于藥物的鑒別、分離、定量測定都有著較高的準確度，本文對高效液相色譜法在藥物分析的各方面進行了簡單的綜述。,2. 高效液相色譜法在藥物分析中的應用2.1 在中藥分析方面的應用 中藥歷史悠久，源遠流長。它不僅是我國醫(yī)藥體系中獨具特色的重要組成部分，也是西方醫(yī)藥，特別是植物藥、

4、天然藥物的有機組成部分。,,,,陳靜嫻，張敏敏等建立分散固相萃取-高效液相色譜(DSPE-HPLC)聯用技術應用于金銀花及其相關中成藥連花清瘟膠囊(LQC)中環(huán)烯醚萜苷類成分(馬錢酸、莫諾苷、馬錢苷、當藥苷、斷氧化馬錢子苷、開聯番木鱉苷二甲基乙縮醛)的快速提取、凈化和測定的方法。方法是分別采用超聲提取法對金銀花及相關中成藥LQC進行提取,采用不同凈化材料進行快速凈化,采用HPLC法測定環(huán)烯醚萜苷類成分。結果采用硅藻土作為凈化劑,金銀花提

5、取物凈化效果較好;采用硅藻土-活性炭(80∶20)的復合凈化劑時,LQC提取物凈化效果較好;且該提取方法操作簡單、快速、樣品用量少、凈化效率高,結合HPLC技術實現了金銀花及相關中成藥LQC中環(huán)烯醚萜苷類成分的快速提取、凈化和測定。結論是拓展了DSPE技術在復雜基質中藥材及中成藥中活性成分提取、凈化中的應用,為復雜基質中藥材及中成藥中活性成分的提取凈化及分析研究提供了方法和數據支持。,藥劑與工藝.2016.47(16):2850-285

6、6.,但由于中藥化學成分的復雜性，中藥成分分析一直存在著分離難度大、分析時間長等問題。近年來，（UPLC）超高效液相色譜分離技術的發(fā)展與成熟有效地彌補了傳統(tǒng)高效液相色譜（HPLC）分析中存在的不足，使中藥化學成分分析進入了高效、高通量的階段。,2.2 在復方制劑分析方面的應用 復方制劑、雜質或輔料干擾因素多的品種多采用高效液相色譜法。重要復方制劑和化學復合制劑通常含有多種有效成分，各有效成分的含量決定了藥物的治療效果。

7、高效液相色譜法適合分子量大、難氣化、對熱敏感等物質的分離分析，因此在中藥復方制劑和化學復合制劑的分析中得到了廣泛的應用。 瀉痢固腸片是由甘草、陳皮、肉豆蔻、白芍、黨參、茯苓等9味中藥材制成的治療腹脹腹瀉的中藥復方制劑，方中陳皮、白芍具有理氣燥濕、益氣健脾之功效，并以甘草調和諸藥，共奏健脾溫腎，澀腸止瀉之功效。齊老師等建立固相萃取-高效液相色譜法同時測定瀉痢固腸片芍藥苷、甘草苷、陳皮苷的含量，該法快速、簡便、準確性高，為

8、瀉痢固腸片的質量控制提供重要科學依據。 西北藥學雜志，2016.27(15):2138-2140.,2.3 在手性藥物分析方面的應用 在生物體內，幾乎所有具有重要生理意義的有機生物分子都有手性，絕大多數都是旋光性物質。兩種化學組成、分子式完全相同的化合物，但因組成化合物的原子在空間取向不同，而成為鏡像的化合物，稱為手性化合物。由于對映體的物理、化學性質相同，實現它們的分離就比較困難，如大多數氨基酸都

9、有右旋體和左旋體，但往往只能獲得右旋體和左旋體的混合物。手性藥物往往呈現一種對映體具有強的生物活性和藥效，而另一種卻無效，有時甚至有毒害作用。目前，各種手性分析技術中，高效液相色譜法對于定量分析和制備分離都是應用最為廣泛的一種技術。,翟明翚； 蘇立強等建立了以羧甲基-β-環(huán)糊精（CM-β-CD）作為手性流動相添加劑,高效液相色譜拆分美索巴莫對映體的方法。在C18色譜柱上,系統(tǒng)考察了手性添加劑的種類及濃度、有機修飾劑的種類及含量、流動相p

10、H值和流速等因素對拆分的影響,確定了最佳色譜分離條件:流動相為甲醇-乙腈-水（體積比為25∶63∶12）,CM-β-CD濃度為0.6 g·L-1,pH=4.16（用三乙胺-冰乙酸調節(jié)）,流速為0.4m L·min-1,檢測波長為220 nm。該方法拆分美索巴莫對映體,方法簡便、經濟、重現性好。,新技術與應用.2016.28(3):416-419.,2.4 在藥物鑒別方面的應用,在HPLC法中,保留時間與組分的結構和

11、性質有關,是定性的參數,可用于藥物的鑒別.如中國藥典收載的藥物頭孢羥氨芐的鑒別項下規(guī)定:在含量測定項下記錄的色譜圖中,供試品主峰的保留時間應與對照品主峰的保留時間一致.頭抱拉定,頭孢噻酚鈉等頭孢類藥物以及地西泮注射液,曲安奈德注射液等多種藥物均采用HPLC法進行鑒別。,3.高效液相色譜法在藥物監(jiān)測中的應用3.1 中藥材指紋的建立 隨著中藥的普及，中藥材急需國際化、標準化。而中藥材的指紋圖譜研究是其標準化的必經之路。中藥指紋

12、圖譜的建立，應以系統(tǒng)的化學成分研究和藥理學研究為依托，體現系統(tǒng)性、特征性和穩(wěn)定性三個基本原則。為此，才能保證指紋圖譜的標準化、規(guī)范化、客觀化，從而便于推廣和應用。利用HPLC技術，建立藥材或中成藥特征的色譜或光譜的圖譜是一種有效的方法。,如肖鳳艷； 張克勤等建立烏腺金絲桃高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜,試驗采用HPLC法,將樣品經甲醇超聲提取,選用shim-pack VP-ODS C18色譜柱(4.6 mm×150 mm,5

13、μm);柱溫40℃;流動相為甲醇和6 mmol/L磷酸氫二鈉(磷酸調至p H值為6.5),梯度洗脫;分段用260 nm、324 nm、408 nm、588 nm檢測;流速為0.6 mL/min的系統(tǒng)條件下進行研究。結果表明:此種檢測方法的穩(wěn)定性和重復性均符合要求;通過隨機對10批藥材樣品的監(jiān)測分析,建立了烏腺金絲桃中藥材的HPLC指紋圖譜,共標定了24個共有指紋峰。說明所用方法穩(wěn)定、可靠、重復性好,可為烏腺金絲桃中藥材的質量控制提供參考

14、。,獸藥飼料.2016(502):169-171.,3.2 臨床治療藥物的監(jiān)測 HPLC法不需要對樣品進行高溫汽化，一般不必進行衍生化處理；并且其固定相種類較多，流動相通過改變其組成成分及比例，可以對絕大多數有機化合物藥物進行分離測定。因此，HPLC法是一種比較成熟的，臨床藥物監(jiān)測方法。,莊奕筠； 張吟等建立超高效液相色譜法測定人血清中卡馬西平(CBZ)、苯妥英鈉(PHT)、苯巴比妥(PB)、奧卡西平(OXC)活性代謝產物利

15、卡西平(MHD)的濃度。方法于2014年1月2015年6月收集血清樣品經甲醇沉淀蛋白后直接進樣測定,采用Shim-pack XR-ODSⅢ柱(1.6μm,75 L×2.0)。流動相為甲醇-水,采用梯度洗脫程序;掃描波長200～360 nm,檢測波長為210 nm,流速:0.4 m L/min,柱溫:35℃,進樣體積:10μL。結果 CBZ、PHT、PB、MHD均能達到良好分離,與相鄰峰的分離度(R)均>1.5;線性范圍分

16、別為(1.00～ 32.00)μg/mL(r=0.9997)、(2.55～81.60)μ g/mL(r=0.9997)、(2.35～75.20)μg/mL(r=0.9999)、(2.50～80.00)μg/m L(r=0.9998);方法回收率>97%;日內和日間精密度的相對標準偏差(RSD)均<1.6%。結論超高效液相色譜法(UPLC)快速、簡便、準確,適用于臨床治療藥物監(jiān)測。,藥物研究.2016.54(12):105-1

17、11.,4.高效液相色譜法在藥代動力學中的研究 HPLC能同時進行分離和定量測定的優(yōu)點在治療藥物檢測和藥物代謝動力學中體現地尤為突出。為了達到藥品應用的安全、有效、可靠，這就需要了解和研究藥物及其制劑在體內的過程（吸收、分布、代謝、排泄），以便研究藥物的作用機制及藥效學。同時隨著藥物分析技術的不斷進步和發(fā)展，可對人體和動物體內（體液、組織和血中）藥物及其代謝物的濃度進行定量分析，它對藥品的評價、指導臨床合理用藥和藥代動力學研

18、究均具有重要的意義和現實需要。,馮素香等建立蘆薈大黃素在大鼠血漿中的固相萃取-高效液相色譜分析方法,研究大鼠體內的藥代動力學過程。SD大鼠,按50和20mg.kg-1劑量灌胃給藥,不同時間點尾靜脈取血,以SPE處理血漿樣品,用HPLC內標法測定血藥濃度,甲醇-0.1%磷酸水(70∶30)為流動相,柱溫為30℃,檢測波長254 nm,以DAS2.0軟件計算藥代動力學參數。結果:血漿中蘆薈大黃素在0.016～19.53μg.mL-1(r=0

19、.998 1)范圍內線性關系良好,提取回收率為88.7%～94.6%,最低檢測限為0.008μg.mL-1,定量限為0.016μg.mL-1,日內和日間精密度RSD均<6%.建立的測定大鼠體內蘆薈大黃素含量的方法具有良好的準確度、精密度以及專屬性,適用于蘆薈大黃素在大鼠體內的藥代動力學研究。,中國新藥雜志，2012.21(8):908-911.,5.高效液相色譜法未來的發(fā)展方向 高效液相色譜法在現在分離中發(fā)揮著重要的作用

20、，已廣泛應用于各個領域，在今后的研究中，高效液相色譜仍然會在藥物分析中扮演非常重要的角色，高效液相色譜法今后在以下三個方面著重發(fā)展。 縮短分析時間,提高分離效率 進一步向自動化、智能化及聯用技術上發(fā)展 高效液相色譜在中藥分析中的發(fā)展,,,,[1]王靜，魏娜，等.HPLC、UPLC測定芪參益氣滴丸中5個丹參活性成分含量的比較研究[J].藥物分析雜志2011.31(9):1678-168

21、2.[2]楊水艷,謝笑天,葉青松，等.鉑類抗癌配合物的高效液相色譜法研究進展. 貴金屬，2011.32(3):90-95.[3]馮素香,徐會平,等.大鼠血漿中蘆薈大黃素濃度的固相萃取-高效液相色譜法測定及其藥代動力學研究[J].中國新藥雜志，2012.21(8):908-911.[4] 齊廣才,吳江瑞,等.固相萃取-高效液相色譜法測定瀉痢固腸片中芍藥苷、甘草苷、橙皮苷的含量[J].中南藥學，2016.04：418-421

22、.[5]齊廣才,等.HPLC法同時測定復方消痔栓中3種成分的含[J].西北藥學雜志，2016.27(15):2138-2140.[6]肖鳳艷等.烏腺金絲桃HPLC指紋圖譜初步研究[J].獸藥飼料.2016(502):169-171.[7] 邵林，郭慶梅，等.山東不同栽培品種金銀花HPLC指紋圖譜的比較[J].中國實驗方劑學雜志，2011.17(19):117-121. [8] 王轉,尹東東,等.高效液相色譜法在手性藥物分析中的研