高效液相色譜法在幾種中草藥中的應(yīng)用研究.pdf

1、高效液相色譜法（HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC）是現(xiàn)代一種重要的新型分離分析技術(shù)，具有分離效能好、檢測(cè)靈敏度高、分析速度快、適用范圍廣和操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。它是采用高壓輸液系統(tǒng)將流動(dòng)相送入色譜柱中，各成分在柱內(nèi)被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。目前，該方法已廣泛的應(yīng)用于食品分析、環(huán)境監(jiān)測(cè)、生物工程、制藥工業(yè)等科學(xué)領(lǐng)域。
　　 中國(guó)是中草藥的發(fā)源地，中草藥中的有效成分

2、是預(yù)防治療疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)，其含量的多少已成為評(píng)估中藥質(zhì)量的重要標(biāo)志。近年來(lái)，隨著生活水平的不斷提高，使得人們“回歸自然”的要求日趨強(qiáng)烈，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)中藥中天然成分的研究提出了許多新方法新思路，現(xiàn)代的分析技術(shù)也在中藥研究中得到廣泛的應(yīng)用。其中，高效液相色譜法(HPLC)是中藥質(zhì)量分析最重要的手段之一。
　　 樣品前處理是色譜分析前的一個(gè)重要步驟，由于中藥是一個(gè)典型的復(fù)雜未知樣品，各成分的物理化學(xué)性質(zhì)不同，含量相差大，因此，樣品前處

3、理技術(shù)的先進(jìn)與否，往往是色譜分析成敗的關(guān)鍵。
　　 本文由緒論和研究報(bào)告兩部分組成。緒論部分簡(jiǎn)單介紹了高效液相色譜法的特點(diǎn)和發(fā)展?fàn)顩r、酚類(lèi)化合物和樣品前處理技術(shù)的研究進(jìn)展。研究報(bào)告部分建立了虎杖中白藜蘆醇的提取測(cè)定:高良姜中槲皮素、山奈酚、高良姜素的分離測(cè)定;小兒瀉速停顆粒中沒(méi)食子酸、兒茶素、表兒茶素的分離測(cè)定;
　　 1、膠束萃取-高效液相色譜法測(cè)定虎杖中的白藜蘆醇
　　 以5％(w/v)的非離子表面活性劑Tr

4、itonX-100為萃取劑，建立了一種簡(jiǎn)便綠色的膠束提取-高效液相色譜測(cè)定虎杖中的白藜蘆醇的方法。色譜柱為phenomenexC18(250mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相為甲醇-0.25％乙酸等度洗脫，流速0.8mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)306nm。白藜蘆醇在0.04～200μg/mL，(r=0.9998)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，定性檢測(cè)限(S/N=3)為9.46ng/mL，加入6％的NaCl來(lái)進(jìn)行濁點(diǎn)富集，可提高萃取回收率，加標(biāo)回收率

5、為94.47％。
　　 2、超聲提取-高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定高良姜中的槲皮素、山奈酚、高良姜素
　　 建立基于非離子表面活性劑超聲提取-反相高效液相色譜法同時(shí)分離測(cè)定高良姜中槲皮素、山奈酚、高良姜素的方法。方法:采用phenomenexC18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm);流動(dòng)相為乙腈-0.25％冰醋酸水溶液，采用梯度洗脫;流速1.0mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)360nm。通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)確定最優(yōu)提取方案為:在40℃下，

6、100倍量的8％TritonX-100溶液超聲提取40min。結(jié)果:槲皮素、山奈酚和高良姜素分別在0.0076～76μg/mL,(r=0.9999);0.0064～64μg/mL,(r=1.0000);0.0152～152μg/mL，(=0.9999)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，定性檢測(cè)限(S/N=3)依次為:7.32ng/mL，1.92ng/mL，1.13ng/mL;結(jié)論:該方法簡(jiǎn)便快速、靈敏度高、成本低、綠色環(huán)保，適用于高良姜中黃酮類(lèi)物質(zhì)的

7、含量測(cè)定，為高良姜中黃酮化合物的的檢測(cè)及分離提供了一個(gè)有效的科學(xué)方法。
　　 3、膠束萃取-高效液相色譜法測(cè)定小兒瀉速停顆粒中的多酚類(lèi)化合物
　　 建立了基于表面活性劑膠束萃取-反相高效液相色譜法同時(shí)分離測(cè)定小兒瀉速停顆粒中沒(méi)食子酸、兒茶素、表兒茶素的方法。方法:采用phenomenexC18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）;流動(dòng)相為乙腈-0.2％冰醋酸水溶液，采用梯度洗脫;流速0.8mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)280

8、nm?？疾炝松V條件，優(yōu)化了膠束萃取和濁點(diǎn)富集參數(shù)。結(jié)果:沒(méi)食子酸、兒茶素和表兒茶素分別在0.0104～223μg/mL，(r=0.9999);0.0152～108μg/mL，(r=0.9999);0.0184～132μg/mL，(r=0.9999)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，定性檢測(cè)限(S/N)依次為:0.087ng/mL，0.43ng/mL，0.42ng/mL;在優(yōu)化條件:5％TritonX-100表面活性劑;固液比為1∶100(g/mL)