高效液相色譜法在中草藥黃酮類化合物和水中有機(jī)磷農(nóng)藥分析中的應(yīng)用研究.pdf

1、高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)具有高壓、高效、高靈敏度、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，在現(xiàn)代分析領(lǐng)域如食品衛(wèi)生、環(huán)境安全、石油化工、天然產(chǎn)物、生物工程等方面具有非常廣泛的應(yīng)用。高效液相色譜的分離原理是利用分析物在固定相上的吸附、解吸速率差異，色譜柱對(duì)不同分析物的保留時(shí)間不一樣，使各成分依次流出色譜柱而達(dá)到分離的目的。在進(jìn)行高效液相色譜分析之前，需要對(duì)分析樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)那疤幚?，?/p>

2、且前處理的好壞直接影響檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性。近年來(lái)，許多樣品前處理技術(shù)被開發(fā)出來(lái)并用于實(shí)際樣品的分析，綠色、簡(jiǎn)單、快速的前處理方法一直是廣大研究者致力于發(fā)展的方向。
　　本文由兩部分構(gòu)成：緒論部分和研究報(bào)告。第一部分緒論論述了高效液相色譜、中草藥和樣品前處理的發(fā)展和應(yīng)用情況。第二部分研究報(bào)告建立了三味中藥中黃酮和有機(jī)酸以及水樣中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的提取分離方法。
　　1.高效液相色譜法同時(shí)分離石韋中綠原酸、槲皮素和山柰酚

3、　　以甲醇作為萃取劑，建立超聲波萃取-高效液相色譜法分離和測(cè)定石韋中綠原酸、槲皮素和山柰酚的方法。采用Phenomenex C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm)；流動(dòng)相為甲醇和pH＝3.0的冰醋酸混合溶液，設(shè)置梯度洗脫程序、1.0mL/min的流速、254nm的紫外檢測(cè)波長(zhǎng)和35℃的柱溫。結(jié)果三種化合物在0.00024～3.00μg(綠原酸)、0.00016～2.00μg(槲皮素)、0.00016～2.00μg(山柰酚)之間線

4、性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r均為0.9999。綠原酸、槲皮素和山柰酚的最低檢出限(S/N＝3)依次為3.29、0.43、0.33ng/mL，加標(biāo)回收率分別為97.73％、98.07%、96.92%。本方法前處理簡(jiǎn)單、分析時(shí)間短、測(cè)定準(zhǔn)確、靈敏度高，為石韋中綠原酸、槲皮素、山柰酚三種成分的分離和定量提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　2.超聲波輔助萃取-高效液相色譜測(cè)定翻白草中7種黃酮和有機(jī)酸
　　基于超聲波輔助萃取技術(shù)，利用高效液相色譜法分離和

5、測(cè)定翻白草中的7種黃酮和有機(jī)酸(綠原酸、咖啡酸、金絲桃苷、槲皮素、柚皮素、山柰酚和芹菜素)。利用Phenomenex C18色譜柱（150mm×4.6mm,5μm）完成綠原酸、咖啡酸、金絲桃苷、槲皮素、柚皮素、山柰酚和芹菜素的分離；流動(dòng)相為甲醇-0.1%的乙酸水溶液，進(jìn)行梯度洗脫；流速1.0mL/min，紫外測(cè)定波長(zhǎng)350nm，柱溫40℃。7在20min內(nèi)完成7種黃酮和有機(jī)酸的色譜分離，并且獲得了滿意的線性方程（r＞0.9995，n=7

6、），樣品的平均回收率為84.61%～104.06%（RSD小于4.77）。最終確定黃酮和有機(jī)酸的最佳提取條件為：用100倍量的80%甲醇溶液超聲時(shí)間20min。對(duì)翻白草樣品的分析表明每0.1g樣品中含有：綠原酸12.15μg、咖啡酸6.0μg、金絲桃苷12.7μg、槲皮素10.8μg、柚皮素29.4μg、山柰酚6.1μg和芹菜素11.4μg。
　　3.益母草中8種有效成分的超聲提取和含量測(cè)定
　　建立了益母草中丁香酸、阿魏酸

7、、蘆丁、大豆素、槲皮素、橙皮素、山柰酚和芹菜素8種有效成分黃酮和有機(jī)酸的超聲提取和含量測(cè)定的方法。InertSustain C18(150mm×4.6mm,5μm)色譜柱用于分離益母草中的8種有效成分；選用甲醇和pH=3.0的乙酸水溶液作為流動(dòng)相梯度洗脫。流速大小為1.0mL/min；定量分析波長(zhǎng)為285nm；柱溫設(shè)置為35℃；進(jìn)樣體積20μL。在最優(yōu)條件下8個(gè)成分達(dá)到完全分離，繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線具有良好的線性，相關(guān)系數(shù)均在0.9991(n

8、=7)以上。加標(biāo)平均回收率(n=3)在89.93%～102.01%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.17%～3.11%。實(shí)驗(yàn)表明本方法容易操作、分析速度快、準(zhǔn)確，為中藥益母草的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。
　　4.固相萃取結(jié)合分散液液微萃取測(cè)定水樣中的四種有機(jī)磷農(nóng)藥
　　建立了水中四種有機(jī)磷農(nóng)藥（水胺硫磷、甲基對(duì)硫磷、三唑磷和殺螟硫鱗）的測(cè)定方法。樣品水溶液依次用固相萃取和分散液液微萃取富集其中的目標(biāo)分析物，處理得到的萃取溶液進(jìn)行高效液相色譜

9、分析。影響萃取效果的因素，包括洗脫溶劑種類和用量、樣品溶液的流速、鹽濃度、萃取溶劑的類型和用量、樣品溶液pH值都進(jìn)行了優(yōu)化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明甲醇作為洗脫溶劑、二氯乙烷作為萃取溶劑效果最佳。在優(yōu)化的條件下，100mL水樣經(jīng)過(guò)固相萃取富集目標(biāo)物，用1mL的甲醇作為洗脫劑。在樣品加標(biāo)實(shí)驗(yàn)中，獲得了較高的富集因子和滿意的回收率(大于86.9%)，檢測(cè)限為0.021-0.15μg/L。0.5μg/L的加標(biāo)樣品溶液的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.9-6.8%(n=