新索拉菲尼衍生物DCT015的抗胃癌作用及機(jī)制研究.pdf

1、DCT015是一個(gè)新Sorafenib衍生物。山東綠葉制藥有限公司非臨床研究部前期研究結(jié)果表明 DCT015在多個(gè)體外和體內(nèi)腫瘤模型篩選試驗(yàn)中顯示了較好的抗腫瘤活性。我們推測(cè)基于母核結(jié)構(gòu)，DCT015可能保留部分索拉菲尼的機(jī)制，本研究旨在考察DCT015的抗胃癌作用和它潛在的分子作用機(jī)制，實(shí)驗(yàn)內(nèi)容主要包括藥效學(xué)研究和藥代動(dòng)力學(xué)研究?jī)蓚€(gè)部分。
　　藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)分別研究了化合物對(duì)增殖、凋亡、血管新生三個(gè)方面的影響。首先應(yīng)用細(xì)胞毒性分析、

2、細(xì)胞凋亡分析以及流式細(xì)胞術(shù)分析考察了DCT015對(duì)人胃癌細(xì)胞株AGS和BGC823的增殖、凋亡以及細(xì)胞周期的影響；應(yīng)用細(xì)胞毒性分析、傷口愈合試驗(yàn)、內(nèi)皮細(xì)胞成管試驗(yàn)分析 DCT015對(duì)血管新生的影響；應(yīng)用AGS體內(nèi)移植瘤裸鼠模型考察 DCT015的體內(nèi)抑制腫瘤增殖活性；應(yīng)用蛋白印跡分析和免疫組化分析檢測(cè)DCT015對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、血管新生相關(guān)蛋白和信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響。藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)建立了 LC-MS/MS法用于測(cè)定大鼠血漿中DCT0

3、15和Sorafenib的濃度，研究了兩種藥物在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)行為。
　　研究結(jié)果表明，DCT015表現(xiàn)出了較好的抗腫瘤活性，藥物作用一定時(shí)間后，呈劑量依賴性抑制AGS和BGC823細(xì)胞增殖，凋亡陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著增加，且細(xì)胞周期阻滯在sub-G1期；DCT015可以抑制VEGF誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和微管樣結(jié)構(gòu)的形成。體內(nèi)荷瘤模型，每日灌胃給予DCT015可顯著抑制瘤體積和瘤重的增長(zhǎng)。蛋白印跡分析顯示，DCT015可以抑制V

4、EGFR2的磷酸化，進(jìn)而阻斷 Raf/MEK/ERK和 PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路。此外，可以通過(guò)下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1，上調(diào)促凋亡蛋白Caspase3和Bax影響細(xì)胞凋亡。同時(shí)我們對(duì)兩個(gè)化合物的藥動(dòng)學(xué)行為進(jìn)行了研究和比較，采用了液質(zhì)聯(lián)用的方法檢測(cè)灌胃給藥后DCT015和索拉菲尼的血藥濃度，灌胃給予30 mg/kg的同等劑量后，結(jié)果顯示DCT015的AUC約為Sorafenib的1.20倍，Cmax約為Sorafe