E3泛素酶FBXW7正向調(diào)控小鼠炎癥性腸病和CX3CR1int炎性巨噬細(xì)胞的聚集.pdf

1、炎癥性腸病（Inflammatory bowel diseases，IBD）是一種由免疫介導(dǎo)的易復(fù)發(fā)的慢性腸道炎癥性疾病，包括克羅思病(Crohn's disease，CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis，UC)。炎癥性腸病與生活環(huán)境、遺傳因素和自身免疫系統(tǒng)都有關(guān)系，但是炎癥性腸病的發(fā)病機(jī)制還不清楚。蛋白質(zhì)的泛素化在天然免疫細(xì)胞識(shí)別和清除病原體及細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中發(fā)揮著非常關(guān)鍵的作用。E3泛素連接酶可以特異性地識(shí)別靶蛋

2、白，并將不同的泛素鏈連接到靶蛋白上，發(fā)揮不同的功能。E3泛素連接酶FBXW7(F-box and WD repeat domain containing7)在腫瘤的發(fā)生發(fā)展、脂類代謝、細(xì)胞增殖分化以及維持干細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)中都發(fā)揮重要作用，然而它在炎癥中的調(diào)控作用研究極少。
　　在本研究中，我們構(gòu)建了髓系細(xì)胞中特異性敲除FBXW7基因的小鼠（Lysm+FBXW7f/f mice）。通過飲水喂養(yǎng)葡聚糖硫酸鈉(Dextran sulfate

3、 sodium salt，DSS)和三硝基苯磺酸(Picrylsulfonic acid solution，TNBS)直腸給藥建立IBD模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與WT小鼠相比，KO小鼠的腸道炎癥表現(xiàn)出疾病減輕的癥狀。ELISA檢測(cè)小鼠血清和腸道組織培養(yǎng)上清中IL-6、IL-10和TNF-α水平，發(fā)現(xiàn)KO小鼠的IL-6和TNF-α的水平較WT小鼠相比有明顯的降低，而IL-10的水平升高。RT-qPCR檢測(cè)炎癥模型小鼠的腸道固有層細(xì)胞IL-6、IL

4、-10和TNF-α的mRNA表達(dá)水平，KO小鼠的IL-6和TNF-αmRNA水平降低，IL-10的表達(dá)增加。在炎癥的恢復(fù)過程中，KO小鼠比WT小鼠恢復(fù)得更快，具體表現(xiàn)在炎癥恢復(fù)第8天時(shí)，KO小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度長(zhǎng)于WT小鼠。ELISA和RT-qPCR檢測(cè)小鼠結(jié)腸組織的IL-6和TNF-α炎癥因子水平，KO小鼠均低于WT小鼠，H&E染色也表明KO小鼠腸道損傷減輕。
　　巨噬細(xì)胞在炎癥性腸病中被認(rèn)為在促進(jìn)炎癥進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。在急性炎癥的情

5、況下，小鼠腸道固有層的Ly6C+單核細(xì)胞分化成促炎的CX3CR1int巨噬細(xì)胞，這些巨噬細(xì)胞參與感染和炎癥反應(yīng)，加重疾病的發(fā)生。我們檢測(cè)發(fā)現(xiàn)WT小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞對(duì)LPS刺激的敏感度更高，并且分析比較了WT和KO小鼠IBD模型腸道組織中巨噬細(xì)胞的比例。結(jié)果表明，F(xiàn)BXW7缺陷小鼠體內(nèi)炎性相關(guān)的CX3CR1int巨噬細(xì)胞在腸道固有層的聚集減少，并且KO小鼠的結(jié)腸組織中檢測(cè)到趨化因子CCL2和CCL7的表達(dá)水平顯著下降，這兩個(gè)趨化因子CCL