E3泛素連接酶FBXW7調(diào)控小鼠樹突狀細(xì)胞成熟.pdf

1、樹突狀細(xì)胞（Dendritic Cells，DCs）是專職的抗原提呈細(xì)胞(Antigen PresentingCells，APC)，其在免疫應(yīng)答的啟動(dòng)過程中發(fā)揮非常重要的作用。DCs的效應(yīng)功能與其成熟的狀態(tài)密切相關(guān)。未成熟的DCs具有很強(qiáng)的抗原加工能力，表達(dá)低水平的MHCⅡ類分子以及共刺激分子，其提呈抗原和誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的能力較弱。未成熟的DCs受到某些刺激（例如LPS）后逐漸成熟，抗原提呈和免疫激活作用加強(qiáng)，形成抗原肽-MHCⅡ類分子復(fù)

2、合物為T細(xì)胞活化提供第一信號(hào)，同時(shí)還會(huì)高表達(dá)CD80、CD86、CD40等共刺激分子，為T細(xì)胞活化提供第二信號(hào)。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在生命體中具有非常重要的作用，其中蛋白質(zhì)的泛素化是一種常見的修飾方式，并且泛素化修飾在天然免疫細(xì)胞識(shí)別、清除病原體及細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)等過程中扮演重要的角色。SCF(SKP1-CUL1-F-box protein) E3泛素連接酶復(fù)合物由接頭蛋白SKP1，骨架蛋白Cullin-1，底物識(shí)別亞基或者F-box蛋白以及R

3、ING組件RBX1或RBX2組成。FBXW7是SCF E3泛素連接酶復(fù)合物中F-box蛋白中的一員，之前發(fā)現(xiàn)僅在K48位發(fā)生泛素化隨后降解靶蛋白，它在腫瘤的發(fā)生發(fā)展、脂類代謝、細(xì)胞增殖分化以及維持干細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)等一系列生命活動(dòng)中均扮發(fā)揮重要的調(diào)控功能，本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)FBXW7在炎癥中也發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，然而它是否調(diào)控樹突狀細(xì)胞的功能此前并未有人闡明。
　　本課題的研究目的是觀察髓系特異性敲除FBXW7基因后小鼠樹突狀細(xì)胞的成熟及其

4、功能的變化。我們使用Cre-LoxP重組酶系統(tǒng)構(gòu)建了髓系細(xì)胞中特異性敲除FBXW7基因的小鼠(Lysm+FBXW7fl/fl mice，F(xiàn)BXW7 KO)，取小鼠的骨髓細(xì)胞在細(xì)胞因子GM-CSF以及IL-4的作用下，體外將骨髓前體細(xì)胞誘導(dǎo)形成骨髓來源的樹突狀細(xì)胞(bone marrow-deriven dendritic cells，BMDCs)進(jìn)行研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與WT小鼠相比，KO小鼠來源的BMDCs表面共刺激因子CD80、CD86

5、以及MHCⅡ類分子的表達(dá)有明顯的降低。RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)，相比于WT小鼠，KO小鼠來源的BMDCs的IL-6、TNF-α、IL-12等炎癥因子的mRNA表達(dá)水平明顯下降而抗炎因子IL-10的mRNA表達(dá)水平顯著上升。隨后ELISA檢測BMDCs培養(yǎng)上清中的IL-6、IL-10、TNF-α以及IL-1β分泌水平，發(fā)現(xiàn)除了IL-1β沒有明顯變化外，其余結(jié)果與mRNA表達(dá)水平結(jié)果相一致。為了進(jìn)一步探究DCs的效應(yīng)功能，我們將BMDCs與OT

6、-Ⅱ小鼠的脾細(xì)胞共培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，WT小鼠來源的BMDCs能夠活化更多的初始T細(xì)胞，說明KO小鼠的BMDCs的免疫激活功能減弱。最后我們檢測了相關(guān)信號(hào)通路的變化，發(fā)現(xiàn)KO小鼠來源的BMDCs中NF-κB的活化降低而STAT3信號(hào)通路的活化顯著升高，表明這兩條信號(hào)通路可能參與FBXW7對(duì)DCs成熟和功能的調(diào)控。
　　上述研究結(jié)果顯示了E3泛素連接酶FBXW7對(duì)小鼠BMDCs的成熟及其效應(yīng)功能有促進(jìn)的作用，為進(jìn)一步深入研究其機(jī)制建立了基礎(chǔ)