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文檔簡介
1、神經(jīng)介素S(Neuromedin S,NMS),是日本學者Mori等人于2005年發(fā)現(xiàn)的一種神經(jīng)肽,主要分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)、脾臟和睪丸組織。與神經(jīng)介素U(NeuromedinU,NMU)享有相同的兩個受體,分別是NMUR1和NMUR2。主要參與晝夜節(jié)律、攝食、生殖、神經(jīng)內(nèi)分泌等的調(diào)節(jié)。對NMS及其受體的研究主要集中在人、大鼠和小鼠等動物上,文獻中暫無對兔NMS及其受體的研究。本研究參照GenBank中已發(fā)表的哺乳動物(豬、牛、人、大鼠、
2、小鼠等)的基因保守區(qū)設(shè)計引物,利用RT-PCR技術(shù)克隆了兔NMS、NMUR2基因部分序列,應(yīng)用生物信息學技術(shù)對其基因進行了序列分析和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能預測;其次,根據(jù)克隆出的已知兔NMS、NMUR2序列,利用Primer5.0軟件重新設(shè)計PCR引物,對NMS、NMUR2 mRNA在兔體內(nèi)各個組織的分布進行了研究。并探討了熱應(yīng)激時下丘腦-垂體-腎上腺軸NMS表達的變化。結(jié)果如下:
(1)用RT-PCR技術(shù)首次成功地克隆了兔NM
3、S和NMUR2基因部分序列,NMS基因片段長370bp,NMUR2長493 bp,已經(jīng)提交到GenBank(登錄號:GQ167047、GQ167048)。
(2)經(jīng)DNASTAR軟件分析兔NMS含有123個氨基酸,NMUR2含有164個氨基酸。氨基酸比對發(fā)現(xiàn),兔NMS前體與羊、豬和牛同源性分別為97.6%、99.0%和95.1%;與人、黑猩猩、小鼠和大鼠同源性分別為79.7%、79.7%、70.7%和61.8%。兔NMUR
4、2氨基酸與羊、豬和牛同源性分別為92.7%、87.5%和89.6%;與人、小鼠和大鼠的同源性分別為80.5%、76.2%和76.2%。
(3)運用生物信息學技術(shù)預測,兔NMS基因等電點(pI)為10.57,其二級結(jié)構(gòu)以α螺旋和無規(guī)卷曲為主;兔NMUR2基因等電點(pI)為9.91,其二級結(jié)構(gòu)以α螺旋和折疊為主。
(4)兔NMS和NMUR2 mRNA在體內(nèi)分布較廣泛,NMS mRNA在下丘腦、中腦、延髓、氣管、
5、脾等組織表達;NMUR2 mRNA在下丘腦、中腦、延髓、海馬、大腦皮質(zhì)、垂體、心、脾、子宮、卵巢等組織表達。
(5)采用隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱建立42℃熱應(yīng)激兔的模型;使用半定量RT-PCR方法觀測熱應(yīng)激0.5 h、1 h和2 h后兔下丘腦、垂體、腎上腺軸中NMS mRNA的表達情況。在下丘腦NMS mRNA表達隨著熱應(yīng)激時間的增加而增加,在1 h表達豐度開始升高(P<0.05),2 h表達豐度最高(P<0.05);在垂體N
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