熱應(yīng)激下雞下丘腦HSP90和GPR23基因mRNA表達(dá)及SPNs監(jiān)測(cè).pdf

1、熱應(yīng)激是影響雞生產(chǎn)性能的重要因子之一,本研究基于前期獲得的基因芯片表達(dá)譜分析結(jié)果,針對(duì)已經(jīng)篩查到的與雞熱應(yīng)激相關(guān)的候選基因(HSP90,GPR23和ITGA8)開(kāi)展進(jìn)一步的功能研究。
　　1.持續(xù)熱應(yīng)激后恢復(fù)常溫過(guò)程中HSP90與GPR23在不同群體中的mRNA表達(dá)情況:分別選取8周齡健康強(qiáng)健的淮南麻黃雞(H)和文昌雞(W)公雞各126只,將室溫快速提升至(35±1)℃并以此時(shí)作為熱應(yīng)激起始(0h),持續(xù)高溫(35±1)℃處理72

2、h后恢復(fù)正常室溫(24±1℃)。采集兩個(gè)品種高溫處理0、12、24、72h及恢復(fù)常溫后12、24、72h各時(shí)間點(diǎn)18只個(gè)體的下丘腦組織。利用熒光定量PCR技術(shù),檢測(cè)HSP90,GPR23基因在H和W下丘腦組織中各時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)量變化情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn),HSP90持續(xù)高溫72h至恢復(fù)常溫72h過(guò)程中,在H和W下丘腦組織中的表達(dá)趨勢(shì)相似:均表現(xiàn)為先上升后下降趨勢(shì),24h表達(dá)豐度最高,且HSP90在H下丘腦各時(shí)間點(diǎn)中的表達(dá)量均高于W。GPR23在H

3、中的表達(dá)情況為:隨著高溫持續(xù)時(shí)間的延長(zhǎng),0-72h的表達(dá)量持續(xù)升高,72h表達(dá)量達(dá)到最高,室溫恢復(fù)正常后12-72h,表達(dá)量逐漸降低。在W下丘腦中的表達(dá)量在高溫處理的0-24h表達(dá)量急劇上升,24h達(dá)到最高峰(P<0.05),之后表達(dá)量呈逐漸下降的趨勢(shì)。
　　2.SNPs檢測(cè):通過(guò)DNA直接測(cè)序的方法,對(duì)候選基因(HSP90、GPR23、ITGA8)的外顯子及部分內(nèi)含子區(qū)域進(jìn)行SNP位點(diǎn)檢測(cè),分別在HSP90的W4-87、GPR2

4、3的A2-767G和ITGA8的A4-2798G位置各發(fā)現(xiàn)一個(gè)突變位點(diǎn)。通過(guò)比對(duì)發(fā)現(xiàn)HSP90W4-87位于第四外顯子,但此位點(diǎn)的突變并未引起氨基酸的改變。其他兩個(gè)突變位點(diǎn)分別位于GPR23的第2和ITGA8的第4內(nèi)含子內(nèi)。3個(gè)突變位點(diǎn)在H和W中均處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)。對(duì)各位點(diǎn)在H和W基因型差異比較分析中并未發(fā)現(xiàn)差異顯著基因型(P>0.05)。
　　結(jié)論:HSP90、GPR23在H和W下丘腦中的表達(dá)量在持續(xù)高溫