油菜HSP90伴侶分子-BNP23的靶蛋白鑒定及功能分析.pdf

1、哺乳動(dòng)物體內(nèi)的熱激蛋白90（Heat shock protein 90，HSP90）、熱激蛋白70（Heat shock protein 70，HSP70）、熱激蛋白60（Heat shock protein 60，HSP60）、熱激蛋白40（Heat shock protein 40，HSP40）及熱激蛋白23（Heat shock protein 23，P23）可組裝成特殊的分子伴侶復(fù)合體，作用于某些激素受體、轉(zhuǎn)錄因子、色氨酸激酶等

2、靶蛋白，在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞周期控制、蛋白質(zhì)的降解和轉(zhuǎn)運(yùn)中發(fā)揮重要作用。此復(fù)合體中P23作為HSP90的伴侶分子，能夠和HSP90特異性結(jié)合，調(diào)節(jié)HSP90與ATP或ADP結(jié)合的形式而達(dá)到結(jié)合或釋放靶蛋白的功能。目前動(dòng)物P23穩(wěn)定HSP90和靶蛋白復(fù)合體的功能研究開(kāi)展較多，植物體內(nèi)P23的功能還未明確，擬南芥的抗病蛋白R(shí)PMl（Resistance to Pseudomonas syringae expressing AVRRPMl）是植物

3、體內(nèi)唯一被證實(shí)的HSP90的靶蛋白。在動(dòng)物體外蛋白復(fù)合體功能重建系統(tǒng)中，油菜熱誘導(dǎo)表達(dá)的P23（Brassica napus P23，BNP23）和擬南芥組成性表達(dá)的P23（Arabidopsi thaliana P23，ATP23）能夠和HSP90結(jié)合，但BNP23和ATP23，和人的P23（Homo sapiens P23，HSP23）不同，在體外穩(wěn)定HSP90和外源激素受體形成的復(fù)合體的能力較差，推測(cè)植物和動(dòng)物體內(nèi)的HSP90分子

4、伴侶復(fù)合體作用的靶蛋白可能不同。 為了研究BNP23、ATP23等植物P23的功能，本文以BNP23為誘餌蛋白，用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選擬南芥幼苗的AD-cDNA（Activator domain-cDNA）文庫(kù)，為研究植物體內(nèi)P23在不同靶蛋白復(fù)合體中的功能提供資料。主要研究結(jié)果如下： 1．以BNP23為誘餌蛋白，采用酵母雙雜交技術(shù)篩選擬南芥幼苗的AD-cDNA文庫(kù)，獲得39個(gè)與BNP23有相互作用的蛋白的同源編碼序列，其

5、中擬南芥黑芥子酶結(jié)合蛋白（PYKIO binding protein 1，PBP1）是BNP23的相互作用蛋白之一； 2．經(jīng)體外蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)之間的相互作用和蛋白質(zhì)印跡雜交方法進(jìn)一步驗(yàn)證了PBP1和BNP23的相互作用； 3．用RT-PCR方法檢測(cè)PBP1的表達(dá)情況，結(jié)果表明在成熟擬南芥植株的莖、葉、花中PBP1不表達(dá)，只在根中特異性表達(dá)； 4．通過(guò)同源比對(duì)找到與擬南芥PBP1有較高同源性的油菜的黑芥子酶結(jié)合蛋白