草魚(Ctenopharyngodon idella)Hsp90、Wap65基因的克隆、表達(dá)特性及功能分析.pdf

1、草魚(Ctenopharyngodon idellus)Hsp90(CiHsp90,GU258544)克隆于草魚肝腎cDNA文庫。CiHsp90全長(zhǎng)為2793bp。CiHsp90有廣譜的本底組織表達(dá),經(jīng)34℃短暫誘導(dǎo)后,其表達(dá)水平有一定的上調(diào)。為了解CiHsp90的功能,一方面,克隆了ATPase結(jié)構(gòu)域cDNA與載體連接后轉(zhuǎn)化大腸桿菌進(jìn)行4℃冷、42℃熱激保護(hù)實(shí)驗(yàn)。另一方面,原核表達(dá)、純化獲得該目的多肽PATPase,將PATPase進(jìn)

2、行檸檬酸合成酶凝集實(shí)驗(yàn)。CiHsp90除了對(duì)大腸桿菌有冷,熱保護(hù)作用外,在高溫狀態(tài)時(shí)能夠降低檸檬酸合成酶的凝集程度。
　　 Wap65是機(jī)體參與溫度調(diào)節(jié)和免疫應(yīng)答反應(yīng)的一種應(yīng)激蛋白,它在魚類適應(yīng)變溫生活等方面起重要作用。本文在經(jīng)Poly I:C誘導(dǎo)的草魚肝腎cDNA文庫中篩選并克隆了1個(gè)Wap65(HM629798)。草魚Wap65全長(zhǎng)cDNA為1510bp。進(jìn)化樹顯示,草魚Wap65與斑點(diǎn)叉尾鲴Wap65-2進(jìn)化關(guān)系最近。定量

3、PCR研究草魚Wap65的表達(dá)特征,結(jié)果表明:Wap65在肝中有較強(qiáng)的本底表達(dá),而在脾、腎、腦和腸等組織中該基因表達(dá)非常微弱。34℃熱激2h后,在脾臟中,Wap65的表達(dá)量有一定的上調(diào)；在肝臟中該基因的相對(duì)表達(dá)量大量增加,而在其他受檢組織中Wap65的表達(dá)無明顯變化。Poly I:C誘導(dǎo)以后,在脾臟中,Wap65的表達(dá)量有一定的上調(diào)；在其他受檢組織中無明顯變化。LPS誘導(dǎo)以后,在受檢組織中的表達(dá)量都下調(diào)。因此,草魚Wap65主要在肝臟中