水稻OsSRT基因的克隆及功能分析.pdf

1、在蛋白質(zhì)的修飾中，乙?；缪葜匾慕巧@種修飾從酵母到植物廣泛存在。從生物生長發(fā)育，細胞增殖，損傷修復(fù)中，有重要的影響，其乙酰化與組蛋白的去乙?；?，存在動態(tài)平衡，其起關(guān)鍵作用的酶，乙?；D(zhuǎn)移酶（HATs）和去乙酰化酶(HDACs)扮演著重角色，其去乙?；缚梢苑殖?個家族為RPD3、HDA1、HD2以及SIR2家族，在不同類型的生物中有特別的作用。SIR2家族作為一個NAD+依賴型組蛋白去乙酰化酶家族而熟知，它的結(jié)構(gòu)與其他家族成員的結(jié)

2、構(gòu)不同，也沒有序列同源性，這同時也暗示了，SIR2組蛋白去乙酰化酶具有特別的功能活性，已經(jīng)研究表明SIR2家族在染色體的修飾，染色體結(jié)構(gòu)的改變，均具有作用，但是對于該家族在植物生長發(fā)育的作用，特別是在植株脅迫方面的作用卻鮮為人知。
　　本研究以SIR2家族的水稻OsSRT1乃登錄號(AK069000.1)基因為研究對象，首先Biozol法提取水稻總RNA，通過NCBI已知序列用軟件設(shè)計引物，通過RT-PCR手段擴增得到一段專一特異

3、片段，經(jīng)過測序ORF片段全長為1453bp，與已知序列片段相似度達99％，為了進一步分析該基因在生長發(fā)育特別是在逆境的功能，利用Gateway的試劑盒構(gòu)建到植物表達載體pGWB2得到pGWB2-OsSRT1;利用電轉(zhuǎn)化法將pGWB2-OsSRT1轉(zhuǎn)移到農(nóng)桿菌中去;通過鑒定該表達載體成功轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌工程菌株中作為轉(zhuǎn)基因的工程菌株;利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法把該pGWB2-OsSRT1載體轉(zhuǎn)移到模式生物擬南芥中，對轉(zhuǎn)基因植株T0抗性篩選，以及分子鑒定，

4、確定陽性植株。轉(zhuǎn)基因植株的脯氨酸測定:分別把野生型WT、pB2、轉(zhuǎn)基因型T2-OsSRT1-2試驗材料在正常MS培養(yǎng)基培養(yǎng)2周后以0、50、100、150mmol/LNaCl脅迫處理一周后測定脯氨酸濃度變化，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因型T2-OsSRT1-2在150mmol/L時脯氨酸的積累程度最大，分別是野生型和pB2的1.39和1.47倍，在甘露醇脅迫下脯氨酸的含量變化較為明顯，在200mmol/L甘露醇下，轉(zhuǎn)基因型T2-OsSRT1-2分別是

5、野生型與pB2的1.37和1.11倍，在10mmol/L H2O2，轉(zhuǎn)基因型T2-OsSRT1-2分別是野生型與pB2的1.12和1.2倍。轉(zhuǎn)基因植株的可溶性蛋白的測定:同樣的培養(yǎng)方式，在上述濃度的NaCl處理，結(jié)果顯示在100mmol/L NaCl T2-OsSRT1-2轉(zhuǎn)基因型的可溶性蛋白的含量最高，分別是野生型與pB2的1.05和1.13倍，在150mmol/L NaCl時，三者的可溶性蛋白含量均有所下降，但是轉(zhuǎn)基因型的下降幅度較

6、小，同樣的處理方式下在0～200mmol甘露醇脅迫下，可溶性蛋白的含量逐級遞增，在200mmol/L時達到了最大值，分別是野生型與pB2型的1.10倍與1.08倍，另外在用H2O2脅迫時，在7.5mmol/L時可溶性蛋白的積累量最大，轉(zhuǎn)基因型T2-OsSRT1-2是野生型與pB2的1.28倍和1.09倍。轉(zhuǎn)基因植株的CAT和POD酶的活性測定:在上述培養(yǎng)條件下50mmol/LNaCl處理CAT的酶活性三者的差異較大，轉(zhuǎn)基因型T2-OsS