水稻和玉米組織特異表達(dá)基因的克隆及功能分析.pdf

1、為了研究水稻分化愈傷組織特異基因和玉米雜種一代特異表達(dá)基因,利用抑制消減雜交法(SSH)建立了水稻分化愈傷組織對(duì)愈傷組織的差減文庫(kù)及玉米雜種一代和親本的差減文庫(kù).采用DIG-High Prime分別標(biāo)記9311、Nippobare、Nippobare/9311及珍汕97A、珍汕97B、明恢63、汕優(yōu)63的cDNA,分別與水稻(223個(gè))及玉米(190個(gè))的EST作點(diǎn)雜交,比較不同EST在水稻雜種和親本之間的差異表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn):在223個(gè)

2、水稻EST中秈秈雜種共檢測(cè)到22個(gè)差異EST,占9.9﹪,秈粳雜種中檢測(cè)到33個(gè)差異EST,占14.8﹪;在190個(gè)玉米EST中,秈秈雜種檢測(cè)到18個(gè)差異EST,占9.5﹪,在秈梗雜種中檢測(cè)到25個(gè)EST,占13.2﹪;說明親緣關(guān)系越遠(yuǎn),雜種一代中差異表達(dá)基因成員越多.利用SSH分離得到的片段,分別克隆了水稻RNase L inhibitor(rice-RLI)和rFCA基因的全長(zhǎng)cDNA,并對(duì)它們的基因組序列及功能進(jìn)行了初步研究.在擬

3、南芥中,FCA基因具有控制植物花期轉(zhuǎn)換的作用.通過篩選SSH文庫(kù)并結(jié)合RACE技術(shù),在水稻中克隆到了FCA的同源基因rFCA.RT-PCR分析發(fā)現(xiàn)rFCA在水稻葉片組織中存在4種可變剪接cDNA序列,分別命名為rFCA-1、rFCA-2、rFCA-3和rFCA-4.同源性搜索顯示rFCA-1編碼蛋白與擬南芥FCA-gamma具有較高的同源性,Conserved Domain Search分析表明rFCA-1、rFCA-3和rFCA-4編

4、碼的蛋白均具有FCA-gamma的保守功能域(RNA結(jié)合區(qū)和WW-domain),但是rFCA-3和rFCA-4缺少5'端富含Glycine的區(qū)域的101個(gè)氨基酸,而rFCA-2編碼的蛋白缺少WW-domain.熒光定量PCR發(fā)現(xiàn),在4種rFCA的可變剪接中rFCA-1的相對(duì)含量最高;rFCA-1在分化愈傷組織中的表達(dá)明顯強(qiáng)于在愈傷組織中的表達(dá);在不同品種的葉片組織中,rFCA-1的表達(dá)量變化不大;在珍汕97B的第一次枝梗原基分化期的幼