喉癌組織中MKRN1和HSP90基因表達的研究.pdf

1、前言目前研究發(fā)現(xiàn)，端粒酶活性在大多數(shù)永生細胞及腫瘤細胞中表達增強，與腫瘤的發(fā)生有著密切的關系。端粒酶由端粒酶逆轉錄酶(humantelomerasereversetranscriptase，hTERT)、端粒RNA(telomeraseRNA)和端粒相關蛋白1(TP1)組成。其中hTERT是調控端粒酶活性和端粒長度的主要因素，在細胞永生化和惡性轉化中起關鍵作用。hTERT的功能受諸多因素的影響，MKRN1(MakorinRINGfing

2、erprotein1，MKRN1)基因的編碼產物是hTERT降解過程中的關鍵酶，MKRN1基因的過表達可促進hTERT的降解，降低端粒酶的活性和端粒的長度。熱休克蛋白90(heatshockprotein90，HSP90)能夠與hTERT結合并促進其活性，使端粒增長，抑制Hsp90的功能將促進端粒酶降解。在正常細胞中MKRN1和HSP90基因的表達保持動態(tài)平衡，端粒酶活性和端粒長度受這一平衡的調節(jié)。目前MKRN1和HSP90基因與腫瘤發(fā)

3、生的相關性，以及二者相互作用還不十分清楚。因此，本實驗檢測MKRN1和HSP90基因在喉鱗狀細胞癌(以下簡稱喉癌)組織及癌旁正常對照組織中的表達，以探討MKRN1和HSP90基因的相關性及二者在喉癌發(fā)生發(fā)展中的作用。 實驗方法1.材料1.135例喉癌組織標本來源于中國醫(yī)科大學附屬第一臨床學院耳鼻喉科手術切取標本。術前未經化療或放療，術后經病理證實均為鱗狀細胞癌。 1.2總RNA提取相關試劑。 1.3RT-PCR相

4、關試劑。 2.方法：分別取喉癌及癌旁正常對照組織約100mg，提取總RNA，選取OD260/OD280＞1.8的樣品用于反轉錄合成cDNA，再以cDNA為模板以β-actin為內對照分別擴增MKRN1和HSP90基因，取10μlPCR產物經1.5％瓊脂糖凝膠電泳，并在GelScan2Xl凝膠圖像成像儀上掃描，以DNAMarkerDL2000為標準記錄各特異性cDNA擴增帶密度，以目的基因的cD-NA擴增片段密度與相應的內參照β-

5、actin擴增片段密度的比值作為其mRNA表達水平的定量指標。數(shù)據(jù)采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分析。 結果1.35例喉癌中有18例MKRN1基因mRNA表達下調，占51.4％(18/35)，16例HSP90基因mRNA表達上調，占45.7％(16/35)。MKRN1基因在喉癌組織中的表達水平低于癌旁正常對照組織(P＜0.01)，HSP90基因在喉癌組織中的表達高于癌旁正常對照組織(P＜0.05)，差異均有顯著性。