硬骨魚類補(bǔ)體關(guān)鍵因子C1q及免疫球蛋白分子克隆、進(jìn)化和功能的初步研究.pdf

1、本論文對斑馬魚中補(bǔ)體經(jīng)典途徑中關(guān)鍵基因C1q以及免疫球蛋白基因進(jìn)行了鑒定、功能以及進(jìn)化的研究，共分為兩個(gè)部分內(nèi)容。
　　 第一部分應(yīng)用生物信息學(xué)方法，利用基因組和EST數(shù)據(jù)庫，在斑馬魚(Danio rerio)中成功預(yù)測并克隆了補(bǔ)體經(jīng)典途徑的關(guān)鍵基因Clq的ClqA、ClqB、ClqC三個(gè)亞基編碼基因，并結(jié)合哺乳動物、軟骨魚以及七鰓鰻(Lamprey)發(fā)現(xiàn)中報(bào)道的Clq基因，對它們進(jìn)行了基因結(jié)構(gòu)與分子進(jìn)化等分析.同時(shí)，在硬骨魚中

2、對整個(gè)Clq家族成員進(jìn)行了進(jìn)化分析，提出了Clq家族和EMU家族存在進(jìn)化關(guān)系，另外，利用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)了斑馬魚ClqA、ClqB和ClqC頭部結(jié)構(gòu)域蛋白，研究了它們在補(bǔ)體經(jīng)典途徑中的作用。研究顯示，斑馬魚ClqA、ClqB和ClqC并能和體外聚合的斑馬魚IgM重鏈恒定區(qū)結(jié)合，但是不能結(jié)合體外聚合的IgZ重鏈恒定區(qū)。在以鯽魚血清為材料進(jìn)行的補(bǔ)體經(jīng)典途徑研究表明，魚類中存在補(bǔ)體經(jīng)典途徑，并且ClqA、ClqB和C1qC分子均參與經(jīng)典途徑.

3、此外，魚類C1qA、ClqB和ClqC還能與人熱聚的IgM和IgG結(jié)合，魚類ClqA、ClqB和ClqC的頭部結(jié)構(gòu)域能競爭性抑制兔Clq介導(dǎo)的經(jīng)典途徑引起的溶血反應(yīng)。
　　 第二部分克隆了多個(gè)斑馬魚免疫球蛋白基因，包括已知的IgM，IgZ基因和另外兩個(gè)新的免疫球蛋白基因，其中之一與斑馬魚IgZ有一定相似性，稱為Ig2-2基因，另一個(gè)為由IgM的膜型外顯子直接與CH1末端連接的分子，對它們進(jìn)行了生物信息學(xué)分析，在mRNA水平檢測了

4、Ig2-2在斑馬魚各個(gè)器官以及受精卵各個(gè)發(fā)育的表達(dá)情況，結(jié)果表明，Ig2-2主要表達(dá)于頭腎、腸和皮膚，在受精卵發(fā)育的14天開始表達(dá)。
　　 C1q分子是補(bǔ)體分子經(jīng)典途徑的起始分子，補(bǔ)體經(jīng)典途徑起始于C1q的兩個(gè)或多個(gè)球形頭部和免疫復(fù)合物中的IgM或IgG分子結(jié)合，本文首次克隆了斑馬魚Clq的三個(gè)分子ClqA、C1qB和ClqC以及斑馬魚的免疫球蛋白分子，對它們進(jìn)行了生物信息學(xué)分析，并用Elisa分析了Clq和免疫球蛋白之間的關(guān)系