龍須藤化學(xué)成分研究及龍須藤總黃酮抗凝血藥效的初步研究.pdf

1、目的：
　　龍須藤（Bauhinia championii(benth.)Benth）為豆科羊蹄甲屬植物龍須藤的干燥藤莖，其性平、苦澀、無毒，具有祛風(fēng)除濕、行氣活血的功效，臨床用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腰腿疼、跌打損傷等癥。現(xiàn)代藥理研究表明，龍須藤提取物具有較強(qiáng)的抗炎鎮(zhèn)痛、抗風(fēng)濕骨痛、抗血小板凝集等活性，主要含有黃酮類、多糖、揮發(fā)油等化學(xué)成分。本文研究了龍須藤的化學(xué)成分、龍須藤總黃酮的抗凝血藥效及其有效物質(zhì)的含量測定方法，為研究闡釋龍

2、須藤總黃酮抗凝血的作用機(jī)制及開發(fā)研制新型抗凝劑奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　?。?）對龍須藤乙酸乙酯部位化學(xué)成分研究；采用硅膠柱層析色譜、凝膠柱色譜等技術(shù)對其化學(xué)成分進(jìn)行分離純化。
　?。?）建立RP-HPLC法測定龍須藤總黃酮中5,7,3',4',5'-五甲氧基黃酮和5,6,7,3',4',5'-六甲氧基黃酮含量的方法。
　?。?）建立一個關(guān)于龍須藤總黃酮中兩種多甲氧基黃酮的薄層鑒別方法。
　?。?）龍須藤總

3、黃酮抗凝血活性的初步研究；采用毛細(xì)玻管法測定小鼠體內(nèi)凝血時間；采用斷尾法測定小鼠體內(nèi)出血時間的影響；采用試管法測定龍須藤總黃酮對小鼠體外凝血時間的影響，并對小鼠血漿復(fù)鈣時間進(jìn)行測定。
　　結(jié)果：
　?。?）經(jīng)過反復(fù)柱層析硅膠色譜和葡聚糖凝膠色譜等手段，從龍須藤乙酸乙酯部位中分離得到2個化合物，經(jīng)用理化性質(zhì)鑒別、現(xiàn)代波普技術(shù)與文獻(xiàn)對照相結(jié)合的方法，鑒定出2個化合物，分別是5,7,3',4',5'-五甲氧基黃酮和5,6,7,3'

4、,4',5'-六甲氧基黃酮。
　　（2）5,7,3',4',5'-五甲氧基黃酮和5,6,7,3',4',5'-六甲氧基黃酮分別在1.974~13.818μ g·ml-1（R2=0.9999），2.563~17.938μ g·ml-1（R2=0.9998）與峰面積呈良好的線性關(guān)系，平均回收率分別為100.65％，99.55%，RSD分別為1.89%，0.91%，龍須藤總黃酮中5,7,3',4',5'-五甲氧基黃酮和5,6,7,3',

5、4',5'-六甲氧基黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為42.00%、35.37%。
　?。?）以5,7,3',4',5'-五甲氧基黃酮和5,6,7,3',4',5'-六甲氧基黃酮為對照品，石油醚-乙酸乙酯（3：10）為展開系統(tǒng)，龍須藤總黃酮薄層鑒別特征明顯，專屬性強(qiáng)。
　　（4）①對小鼠體內(nèi)凝血時間的影響（毛細(xì)玻管法）：龍須藤總黃酮三個劑量均能延長小鼠的凝血時間，其中中劑量組、高劑量組與空白組比較能顯著延長小鼠的凝血時間。
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6、小鼠體內(nèi)出血時間的影響(斷尾法)：龍須藤總黃酮三個劑量組的出血時間均明顯長于空白組。
　?、蹖π∈笱獫{復(fù)鈣時間的影響：龍須藤總黃酮三個劑量組，均能顯著延長了小鼠的血漿復(fù)鈣時間。
　?、軐π∈篌w外凝血時間的影響：龍須藤總黃酮中劑量組、高劑量組與空白組比較，能顯著延長小鼠體外凝血時間。
　　結(jié)論：
　?。?）從龍須藤乙酸乙酯部位分離得到2個化合物。
　?。?）建立了一個HPLC測定龍須藤總黃酮中兩種多甲氧基黃酮