榼藤化學(xué)成分與藥理活性研究.pdf

1、榼藤Entada phaseoloides(Linn.) Merr.是我國傳統(tǒng)藥用植物，藥用部位包括其莖藤(Entadae Caulis)和種子榼藤子(Entadae Semen)。榼藤莖藤曾收載于1977版中國藥典，具有祛風(fēng)、除濕、通絡(luò)之功效，用于治療風(fēng)濕腰腿痛，跌打損傷。榼藤子收載于2010版中國藥典，具有補氣補血、健胃消食、除風(fēng)止痛、強筋硬骨之功效，用于治療水血不足、面色蒼白、四肢無力、脘腹疼痛、納呆食少、風(fēng)濕肢體關(guān)節(jié)瘺軟疼痛、性

2、冷淡。目前對榼藤莖藤和榼藤子的化學(xué)成分、藥理活性的基礎(chǔ)研究尚顯不足。榼藤子其傳統(tǒng)功效作用物質(zhì)基礎(chǔ)不明，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不完善。本實驗室前期對榼藤莖藤的活性篩選中發(fā)現(xiàn)其具有良好的抗氧化活性，該活性首次被發(fā)現(xiàn)，極具研究價值。因此，本研究擬采用化學(xué)成分活性跟蹤方法，對榼藤莖藤進(jìn)行抗氧化活性部位和有效成分的追蹤研究;對榼藤子進(jìn)行藥效物質(zhì)研究;具有一定的研究意義。
　　榼藤莖藤(Entadae Caulis)抗氧化活性物質(zhì)研究:
　　在測定榼

3、藤莖藤乙醇提取物及不同極性部位總黃酮、總酚含量的基礎(chǔ)上，結(jié)合DPPH、ABTS、鐵離子還原、β-胡蘿卜素漂白法、超陽陰離子清除法、脂質(zhì)過氧化六種抗氧化模型的活性篩選，確認(rèn)榼藤莖藤乙酸乙酯部位為最佳抗氧化活性部位。
　　從活性部位——乙酸乙酯部位中分離鑒定出24個化合物，包括20個黃酮類化合物、2個酚類化合物、1個萜類化合物、1個甾體類化合物;其中21個化合物為首次從榼藤屬植物中分離得到。分別為:7，3，4'-三甲氧基槲皮素、5-羥

4、基-3，4'，7-三甲氧基黃酮、(+)-3，3'，5'，5，7-五羥基二氫黃酮、木犀草素、(+)-二氫山奈酚、去氫雙兒茶精、芹菜素、表兒茶素、兒茶素、3-去氧蘇木查爾酮、柚皮素、鼠李檸檬素、4'，7-二羥基黃酮、原兒茶酸、香草酸、5，7，4'-三羥基-3'-甲氧基黃酮、高良姜黃素、蘆丁、5，7，3'，5'-四羥基黃酮、5，2'，5'-trihydroxy-3，7，4'-trimethoxyflavone-2'-O-β-D-glucosi

5、de、表沒食子兒茶精，上述21個成分均為首次從榼藤屬中分離得到，此外尚分得槲皮素、β-谷甾醇、胡蘿卜苷。
　　采用DPPH、ABTS、鐵離子還原、β-胡蘿卜素漂白法、超陽陰離子清除法、脂質(zhì)過氧化六個抗氧化模型對其中22個單體化合物抗氧化活性測定，發(fā)現(xiàn)有良好抗氧化活性的單體化合物8個，表沒食子兒茶精、表兒茶素、兒茶素、槲皮素、5，7，4'-三羥基-3'-甲氧基黃酮、(+)-3，3'，5'，5，7-五羥基二氫黃酮、木犀草素、原兒茶酸;

6、其中表沒食子兒茶精具有顯著清除DPPH和ABTS活性，原兒茶酸具有最強的鐵離子還原能力，5，7，4'-三羥基-3'-甲氧基黃酮具有最強抑制β-胡蘿卜素自氧化作用，槲皮素具有最強超氧陰離子清除活性，表兒茶素具有最強抑制脂質(zhì)過氧作用。
　　榼藤子(Entadae Semen)化學(xué)成分及其主要成分的含量測定研究
　　對榼藤子醇提物按不同極性依次萃取發(fā)現(xiàn)，榼藤子主要化學(xué)成分集中在正丁醇部位。從榼藤子正丁醇中分離鑒定出5個單體化合物，

7、分別為榼藤子苷、榼藤酰胺A-β-D-吡喃葡萄糖苷、榼藤酰胺A、β-谷甾醇、胡蘿卜苷。首次建立了對其中3個活性成分榼藤子苷、榼藤酰胺A-β-D-吡喃葡萄糖苷、榼藤酰胺A進(jìn)行同時含量測定的HPLC方法，并對該方法進(jìn)行了方法學(xué)考察，實驗結(jié)果顯示該方法高效、穩(wěn)定、精確。
　　采用建立的主要化學(xué)成分含量測定HPLC方法對22批不同采集地的榼藤子藥材進(jìn)行3個活性成分含量測定結(jié)果顯示，榼藤子3個主成分總含量平均值為80.061 mg/g。其中榼

8、藤子苷和榼藤酰胺A-β-D-吡喃葡萄糖苷是主要成分，含量分別為64.291～96.505mg/g和7.075～11.961mg/g。榼藤酰胺A的含量變化比較大為0.060～1.736 mg/g。
　　基于傳統(tǒng)功效的榼藤子(Entadae Semen)藥理活性研究
　　最大耐受量實驗顯示:榼藤子醇提取物，最大耐受量倍數(shù)為100倍;榼藤子水提取物，最大耐受量倍數(shù)為200倍;榼藤子炮制品水提取物，最大耐受量倍數(shù)為250倍。榼藤子炮

9、制后毒性降低。單體化合物榼藤子苷和榼藤酰胺A-β-D-吡喃葡萄糖苷的固定劑量法急性毒性研究表明二者均無急性中毒的危險性。
　　采用經(jīng)典抗炎、鎮(zhèn)痛模型對榼藤子醇提物和單體化合物榼藤子苷和榼藤酰胺A-β-D-吡喃葡萄糖苷抗炎、鎮(zhèn)痛傳統(tǒng)功效進(jìn)行了藥效學(xué)研究。發(fā)現(xiàn)榼藤子醇提物和單體化合物均具有顯著的抗炎、鎮(zhèn)痛活性;抑制醋酸所致的腹腔毛細(xì)血管通透性實驗證明榼藤子醇提物和單體化合物的同等劑量活性甚至優(yōu)于陽性藥。通過IFN-γ/STAT1、IL

10、-6/STAT3、TNF-α/NF-κb進(jìn)行抗炎機制初步探究結(jié)果顯示，榼藤子醇提物和單體化合物的對以上細(xì)胞通路無明顯影響。榼藤莖藤抗炎活性可能通過其它路徑發(fā)揮作用，有待進(jìn)一步研究探討。
　　采用胃排空以及腸推進(jìn)動物模型對榼藤子健胃消食功效進(jìn)行考察，發(fā)現(xiàn)榼藤酰胺A-β-D-吡喃葡萄糖苷的高劑量組具有一定促進(jìn)正常小鼠腸推進(jìn)活性。醇提取物高劑量組具有顯著促進(jìn)促進(jìn)阿托品模型小鼠胃排空作用。榼藤子苷和榼藤酰胺A-β-D-吡喃葡萄糖苷高劑量組

11、，醇提物低劑量組具有一定促進(jìn)多巴胺模型小鼠腸推進(jìn)作用。榼藤子苷高、中劑量組具有顯著促進(jìn)多巴胺模型小鼠胃排空作用。
　　對榼藤子醇提物、單體化合物榼藤子苷、榼藤酰胺A-β-D-吡喃葡萄糖苷、榼藤酰胺A進(jìn)行體外細(xì)胞毒活性篩選的結(jié)果顯示，榼藤子醇提物和單體化合物對腫瘤細(xì)胞無抑制作用。
　　榼藤子(Entadae Semen)醇提物及主要成分體外代謝初步研究
　　采用人工胃液、腸道菌孵育研究方法，對榼藤子醇提物和榼藤子苷、榼藤