黃花胡椒化學(xué)成分和藥理活性研究.pdf

1、隨著社會(huì)發(fā)展速度的加快和人們精神生活受到方方面面的壓力，抑郁癥的發(fā)病率逐年提高，其本質(zhì)就是一種常見(jiàn)的情感障礙性精神疾病，同時(shí)也是目前全世界最易致殘的疾病之一。因此從天然產(chǎn)物中尋找有效、優(yōu)效甚至高效，低毒便于應(yīng)用于臨床的結(jié)構(gòu)新穎的化合物尤為必要。黃花胡椒Piperflaviflorum C.DC.系胡椒科(Piperaceae)胡椒屬(Piper)攀援藤本植物。性熱、味辣，入風(fēng)、火塔，有溫通氣血，散寒止痛，止癢之功效;主治:“接崩短嘎”（

2、脘腹脹痛），“納勒接短”（痛經(jīng)），“攏習(xí)哈習(xí)毫”（癬）。生物堿是胡椒屬中的一大類成分，具有抗抑郁、抗炎活性，而黃花胡椒的成分和藥理活性研究極度匱乏，鑒于此，對(duì)黃花胡椒進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分分離工作和藥理活性的篩選顯得尤為重要。這不僅豐富了胡椒屬藥用植物的臨床應(yīng)用;同時(shí)對(duì)新穎的，活性強(qiáng)的，機(jī)理獨(dú)特的天然產(chǎn)物進(jìn)行更加合理的開(kāi)發(fā)和利用;更廣泛地說(shuō)，可以對(duì)我國(guó)少數(shù)民族藥用植物（藏、蒙、維、傣）的開(kāi)發(fā)利用提供堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
　　 故本課題主要著

3、眼于其化學(xué)成分和藥理活性研究:
　　 一、化學(xué)成分研究
　　 1、化學(xué)成分分離和結(jié)構(gòu)鑒定
　　 對(duì)黃花胡椒地上部位的乙醇提取物進(jìn)行系統(tǒng)溶劑的萃取，分為石油醚(PEF)、二氯甲烷(DF)、乙酸乙酯(AF)、正丁醇(BF)、水(WF)五個(gè)部位。采用正相、反相柱層析、制備中壓、制備薄層、半制備液相等各種提取分離技術(shù)，從DF部位中共分出30種化學(xué)成分，鑒定了24種;從AF部位中共分出28種化學(xué)成分，鑒定了22種化學(xué)成分;

4、從BF部位中共分出6種化學(xué)成分，鑒定了2種。去重后共鑒定了42種化學(xué)成分，其中包含3個(gè)新化合物（包括2個(gè)生物堿和1個(gè)酚苷），1個(gè)新的天然產(chǎn)物（苯丙素苷類）。23個(gè)化合物為屬首分，40個(gè)化合物為種首分。所分離的化合物的結(jié)構(gòu)類型主要有生物堿類，黃酮及黃酮苷類，苯丙素及其苷類,嘌呤及其苷類，咪唑類和呋喃類，小分子酚酸及其苷類，甾醇及植物醇等等。
　　 2、總生物堿的制備、含量測(cè)定和定性分析
　　 采用酸提堿沉法從黃花胡椒的乙醇

5、提取物中提取出總生物堿，酸性染料比色法測(cè)定總生物堿含量為56.4％，其中單體胡椒堿含量為52.8％;HPLC-DAD定性分析胡椒堿單體的存在，HPLC-ESI-MS定性分析除胡椒內(nèi)酰胺A、胡椒內(nèi)酰胺B和頭花千金藤酮B三種生物堿類成分外其余11種生物堿存在的可能。
　　 二、主要藥效學(xué)研究
　　 采用經(jīng)典的小鼠強(qiáng)迫游泳模型(FST)對(duì)黃花胡椒總部位(TF)，總生物堿(TA)以及胡椒堿(piperine)進(jìn)行抗抑郁實(shí)驗(yàn)，采用

6、高中低三個(gè)劑量組分別考察不同劑量下總堿及最大量單體胡椒堿對(duì)小鼠游泳不動(dòng)時(shí)間的影響,結(jié)果顯示總部位的高劑量、總生物堿(TA)的高劑量以及胡椒堿(piperine)單體化合物的高劑量顯著延長(zhǎng)小鼠游泳不動(dòng)時(shí)間，顯示出初步的體內(nèi)抗抑郁的活性，同時(shí)總生物堿的活性較胡椒堿的活性沒(méi)有顯著性差異，提示胡椒堿為黃花胡椒藥材抗抑郁的主要活性成分。同時(shí)對(duì)小鼠腦中的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)(5-HT、DA、NE)進(jìn)行了提取和含量測(cè)定，結(jié)果表明5-HT的含量較空白組有明顯

7、的提升，而DA和NE的含量沒(méi)有明顯的提升，表明起作用的活性成分主要是通過(guò)提高腦內(nèi)單胺類遞質(zhì)5-HT的含量來(lái)產(chǎn)生抗抑郁作用。
　　 三、一般藥理活性篩選
　　 1、抗炎
　　 采用脂多糖LPS刺激RAW264.7細(xì)胞株模型對(duì)分得的兩個(gè)新的生物堿flavifloramide A和flavifloramide B進(jìn)行了的體外NO生成抑制實(shí)驗(yàn)，以吲哚美辛為陽(yáng)性對(duì)照藥，初步評(píng)價(jià)這兩個(gè)新的生物堿的抗炎活性，結(jié)果顯示兩個(gè)新的生

8、物堿并沒(méi)有顯示出顯著的體外抗炎活性。采用二甲苯致小鼠耳腫脹經(jīng)典模型，考察黃花胡椒總乙醇提取部位(TF)和胡椒堿單體(piperine)的抗炎活性，結(jié)果顯示TF高低劑量組顯示顯著的抗炎活性，而單體胡椒堿沒(méi)有顯示出明顯的體內(nèi)抗炎活性。
　　 2、抗腫瘤
　　 采用四種腫瘤細(xì)胞株:A-549（人類肺癌細(xì)胞），HCT116（人結(jié)腸癌細(xì)胞），MDA-MB-231（人乳腺癌細(xì)胞），CCRF-CEM（人急性淋巴細(xì)胞白血病T淋巴細(xì)胞）對(duì)