依托泊苷修飾蛋白-聚合物納米粒的制備及體內外評價.pdf

1、依托泊苷(Etoposide，ETO)是植物成分鬼臼脂素的半合成衍生物，它具有廣譜抗癌活性和相當高的治療指數(shù)，尤其是對早期擴散、愈后惡劣的小細胞癌癥效果良好[1,2,3]，是治療小細胞癌和睪丸癌的最強活性單體[3]。但是，依托泊苷水溶性差，口服劑型生物利用度較低，個體差異比較大；而注射液中加入大量表面活性劑增溶，使得其刺激性加大，且使用過程中藥物易析出，降低患者順應性[3]。上述弊端在一定程度上制約了其在臨床上的廣泛應用。因此，為解決這

2、些難題，本課題以聚氰基丙烯酸烷酯類載體作為內核，模擬脂蛋白的結構特征，以依托泊苷為藥物模型，構建了依托泊苷修飾蛋白-聚合物納米粒給藥系統(tǒng)，利用納米粒EPR被動靶向效應以及透明質酸修飾白蛋白主動靶向作用，將依托泊苷靶向于腫瘤部位，減少其在非靶向部位的蓄積，提高依托泊苷的藥物療效。本課題圍繞白蛋白的修飾、依托泊苷納米粒的制備、靶向性、藥效學等方面工作展開一系列研究，全文分為以下五部分內容：
　　一、綜述
　　綜述分兩個部分內容系

3、統(tǒng)闡釋，首先簡單介紹了肝靶向及肝腫瘤靶向制劑的研究進展，其次簡單綜述了聚氰基丙烯酸烷酯類納米粒載體在藥物轉運系統(tǒng)中的應用。這兩個部分內容契合本課題的研究內容，為后續(xù)試驗工作的展開提供理論依據(jù)。
　　二、處方前研究
　　本部分研究建立了ETO的HPLC體外分析方法，并對納米粒的制備方法進行優(yōu)化。實驗表明所選用的ETO體外分析測定方法準確度較高，試驗方法可行。
　　三、依托泊苷白蛋白聚合物納米粒的制備
　　本章節(jié)制備

4、依托泊苷聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒(ETO-PBCA NPs)，并以此為內核，以透明質酸和乙二胺修飾的白蛋白為親水外殼，制備依托泊苷修飾蛋白-聚合物納米粒(ETO-PBCA-BSAmodified NPs)。利用單因素和中心復核設計優(yōu)化處方：α-BCA的用量為50μL，有機溶劑二氯甲烷與甲醇的比例為1:8(V/V)，磷脂、水合膽酸鈉以及PVP的比例4:3:3(W/W/W)。最佳工藝驗證結果顯示：ETO-PBCA NPs的包封率為(78.4

5、4±3.93)％，zeta電位為(-35.22±5.21)mV，平均粒徑為(120.57±2.43)nm，蛋白載附率為(90.3±2.16)%。且在優(yōu)化條件下制備的ETO-PBCA NPs五批樣品各項指標均符合要求，優(yōu)化處方重現(xiàn)性好，包封率穩(wěn)定。
　　四、理化性質及體內外研究
　　本章節(jié)對納米粒制劑的理化性質，體外釋放及大鼠體內藥物動力學進行了研究。透射電鏡圖表明所制得的ETO-PBCA NPs和ETO-PBCA-BSAmo

6、dified NPs大小較為均勻，呈規(guī)則圓球形，表面較為光滑。DSC圖譜顯示ETO是以無定型形態(tài)存在于納米載體中，F(xiàn)TIR圖譜表明ETO與載體PBCA發(fā)生氫鍵締合。體外釋放試驗表明，以PBCA納米粒作為藥物載體對藥物具有緩釋作用，同時在納米粒表面包裹白蛋白也可增強藥物的緩釋作用。同時，考察凍干后的ETO-PBCA-BSAmodified NPs粉末進行初步穩(wěn)定性，結果表明，凍干粉于2~8℃保存3個月的條件下，穩(wěn)定性良好。大鼠體內藥物動力

7、學結果顯示，ETO原料藥在大鼠體內代謝較快，給藥2h后，大鼠血漿內基本檢測不到藥物，且各個時間點的血藥濃度均比制劑組低。而ETO-PBCA NPs和ETO-PBCA-BSAmodified NPs的MRT分別是ETO原料藥的2.84倍與6.35倍。與ETO原料藥相比，兩組納米粒制劑組的t1/2由(0.454±0.103)h延長至(1.07±0.177)h和(2.712±2.046)h，AUC0-t分別為原料藥組的2.22倍4.96倍，F(xiàn)

8、r分別是ETO原料藥的221.82%和496.19%，說明兩種納米制劑ETO-PBCA NPs和ETO-PBCA-BSAmodified NPs均有緩釋作用，且ETO-PBCA-BSAmodified效果最佳。
　　五、小鼠體內組織分布、靶向性以及抗腫瘤藥效學研究
　　本章節(jié)以ICR小鼠為動物模型，考察納米粒在小鼠體內的組織分布、靶向性分布及抗腫瘤藥效學。以依托泊苷原料藥溶液為參比制劑，ETO-PBCA NPs和ETO-PB

9、CA-BSAmodified NPs兩組納米制劑為受試制劑進行研究。ETO-PBCA NPs組和ETO-PBCA-BSAmodified NPs組各時間點心臟和腎臟部位的ETO含量基本維持在2.5μg/g以下，遠遠低于ETO原料組在心臟，腎臟部位的藥物含量。結果顯示，1h后，ETO原料藥組中腫瘤中的藥物濃度已低于檢測限，而ETO-PBCA NPs，ETO-PBCA-BSAmodified兩組中ETO的濃度仍然較高。其中ETO-PBCA-

10、BSAmodified中藥物濃度高達3.2μg/g，且給藥3h后腫瘤中的藥物濃度為1.92μg/g，由此表明，以PBCA-BSAmodified為載體的納米制劑具有良好的腫瘤靶向效應，能夠在腫瘤部位有效蓄積，從而更好發(fā)揮藥物療效。
　　納米粒靶向性評價結果與小鼠組織分布結果一致，同樣說明以PBCA-BSAmodified為載體包載藥物具有腫瘤靶向作用。
　　抗腫瘤藥效學顯示，ETO原料藥、ETO-PBCA NPs，ETO-P

11、BCA-BSAmodified三種制劑尾靜脈注射后對腫瘤生長均有不同程度的抑制作用，在給藥劑量相同的情況下，ETO-PBCA NPs，ETO-PBCA-BSAmodified組較ETO原料藥組荷瘤小鼠腫瘤生長緩慢，其中ETO-PBCA-BSAmodified組最慢。腫瘤抑制率結果顯示ETO原料藥組的抑瘤率為為38.29%，而制劑組的抑瘤率分別為46.33%，61.59%。同時，游離藥物組小鼠體重增長比陰性對照組略低，兩組制劑組小鼠體重增