依托泊苷白蛋白納米混懸劑的研究.pdf

1、目的:肺癌是一種嚴(yán)重威脅人類健康的疾病,近20多年來發(fā)病率呈逐年上升趨勢。依托泊苷(Etoposide,EPEG)是一種細(xì)胞周期特異性抗腫瘤藥物,為治療肺癌的一線用藥,現(xiàn)有上市劑型為注射液和軟膠囊劑。依托泊苷水溶性差,口服劑型生物利用度較低,個體差異較大;注射液采用了大量的表面活性劑增溶,刺激性大,使用過程中藥物易析出,患者順應(yīng)性差;另外,依托泊苷本身常見的不良反應(yīng)為骨髓抑制,可使患者白細(xì)胞及血小板減少等。上述弊端在一定程度上制約了其在

2、臨床上的廣泛應(yīng)用。近年來,以脂質(zhì)體、納米粒等為載體的納米給藥系統(tǒng)在解決難溶性藥物溶解度方面發(fā)揮了巨大的作用。通過制劑手段將難溶性藥物制成納米給藥系統(tǒng)可以增加難溶性藥物的溶解度、提高藥物特別是抗腫瘤藥物在靶向部位的濃度,從而能以最小的藥量達(dá)到令人滿意的治療效果、減少毒副作用的發(fā)生,因此受到了廣大科研工作者的青睞。
　　 納米混懸劑是一種純藥物納米顆粒的亞微細(xì)粒膠態(tài)分散體,近年來,針對此領(lǐng)域的研究十分活躍,其旨在增加藥物的溶解度、生

3、物利用度和給藥的靶向性,目前藥物納米混懸劑正引領(lǐng)納米釋藥系統(tǒng)向前發(fā)展。制備納米混懸劑使那些溶解性差的抗生素類藥物、抗腫瘤藥物和一些治療窗窄的藥物有了重現(xiàn)其自身價值的機(jī)會,使其能夠發(fā)揮出更好的作用。
　　 本課題以白蛋白為載體材料,構(gòu)建了依托泊苷納米混懸劑給藥系統(tǒng),控制其粒徑在100～300hm,利用EPR效應(yīng)及白蛋白的主動靶向作用將依托泊苷靶向于腫瘤部位并緩慢釋放,減少了其在非腫瘤部位的分布,有利于降低其副作用,使其更好的發(fā)揮療

4、效。
　　 方法與結(jié)果:本課題采用高效液相色譜法測定依托泊苷的含量并對其方法學(xué)進(jìn)行考察:采用高壓乳勻-溶劑沉淀法制備依托泊苷納米混懸劑,以粒徑、包封率、載藥量為評價指標(biāo),在單因素考察基礎(chǔ)上,采用正交設(shè)計對處方和工藝進(jìn)行優(yōu)化;采用電子透射顯微鏡觀察納米混懸劑的外觀形態(tài),激光散射粒度分析儀測定粒徑及其粒度分布,電勢顯微電泳儀測定表面Zeta電位,動態(tài)膜透析法測定體外釋藥特性,以零級動力學(xué)方程、一級動力學(xué)方程、Higuchi方程和We

5、ibull方程等數(shù)學(xué)模型擬合其體外釋藥動力學(xué),并對納米混懸劑凍干粉初步穩(wěn)定性進(jìn)行考察;以家兔和小鼠為研究對象,對依托泊苷納米混懸劑進(jìn)行了注射部位局部刺激性、小鼠骨髓抑制等體外評價;采用HPLC法測定家兔血漿、小鼠組織中的依托泊苷的含量,并建立其方法學(xué);以依托泊苷注射劑為對照,分別以家兔和小鼠為研究對象,對依托泊苷納米混懸劑進(jìn)行了體內(nèi)藥動學(xué)和組織分布動力學(xué)的研究。
　　 實(shí)驗結(jié)果表明,采用HPLC法測定依托泊苷納米混懸劑中依托泊苷

6、的含量,輔料不干擾測定,專屬性強(qiáng),方法簡便、靈敏、可行。采用高壓乳勻.溶劑沉淀法制備依托泊苷納米混懸劑,可成功控制該系統(tǒng)的粒徑,優(yōu)化的最佳處方組成為:三氯甲烷與乙醇的比例為8:1(V/V),白蛋白/藥物的比例為10:1(W/W),油相與水相的比例為10:1(V/V),同時控制水相pH值為5.4;最佳的制備工藝為:乳勻壓力1500bar,乳勻次數(shù)15次。冷凍干燥法制備的依托泊苷白蛋白納米混懸劑凍干粉為外觀飽滿、無塌陷的疏松多孔塊狀固體,用

7、生理鹽水復(fù)溶后為具有乳光的膠態(tài)溶液;凍干前的平均粒徑為(190.2±7.3)nm,多分散系數(shù)為0.29±0.08,Zeta電位為(-23.05±1.78)mV;凍干后的平均粒徑為(182.3±8.91)nm,多分散系數(shù)為0.27±0.11,Zeta電位為(-22.18.±0.89)mV;依托泊苷白蛋白納米混懸劑的pH為5.46±0.24,符合注射劑的要求。與市售注射劑相比,自制納米混懸劑的體外釋放表現(xiàn)出一定的緩釋性,釋藥曲線符合Higu

8、chi方程。DSC圖譜顯示,依托泊苷制成納米混懸劑凍干粉后在白蛋白中以無定形狀態(tài)存在。穩(wěn)定性結(jié)果表明,在4℃條件下,依托泊苷納米混懸劑凍干粉在3個月的時間內(nèi)保持穩(wěn)定。
　　 注射部位局部刺激性實(shí)驗結(jié)果表明,受試樣品無明顯刺激性:小鼠骨髓抑制試驗表明,與注射液相比,白蛋白納米混懸劑能明顯降低依托泊苷對小鼠的骨髓抑制。采用HPLC測定家兔血漿、小鼠體內(nèi)組織中的依托泊苷的含量,在所選色譜條件下,內(nèi)源性物質(zhì)不干擾測定,標(biāo)準(zhǔn)曲線、精密度、

9、回收率均符合測定要求。家兔體內(nèi)動力學(xué)試驗結(jié)果表明,靜脈注射給藥后,納米混懸劑組和注射液組分布半衰期(t1/2β)分別為10.296h和5.225h,前者比后者延長了1.97倍;平均滯留時間(MRT0-∞)分別為2.707h和1.170h,前者比后者延長了2.31倍;最大血藥濃度(Cmax)分別為48.05 mg/L和61.08mg/L,納米混懸劑組是注射液組的0.787倍,血藥濃度-時間曲線下面積(AUC0-∞)分別為116.87mg/

10、L*h和111.16 mg/L*h,這表明制備成納米混懸劑后最大血藥濃度得到降低,但并不影響治療效果。
　　 主要以Ce(Ce=(Cmax)nanosuspensions/(Cmax)injection)作為靶向性參數(shù),對納米混懸劑靶向性進(jìn)行了評價。其中,肺中的Ce值是1.93,肝和脾分別是1.79和2.52,而在心、腦、腎中的Ce值分別是0.94、0.95和0.88,該結(jié)果表明納米混懸劑能使依托泊苷的肝、脾、肺靶向性大大提高,

11、相反的在心、腎中的分布有所下降,有利于降低其在這些部位的副作用。
　　 結(jié)論:本課題成功研制了依托泊苷白蛋白納米混懸劑,所采用的制備工藝簡便可行,重現(xiàn)性好,適合工業(yè)化生產(chǎn),成品對注射部位無刺激性、且降低了主藥的骨髓抑制。將依托泊苷制備成納米混懸劑后,明顯改變了藥物的體內(nèi)配置,與市售注射劑相比,納米混懸劑避免了大量表面活性劑的使用,能使藥物濃積于肝、脾、肺部,尤其是增加了肺局部的藥物濃度,藥物的緩慢釋放可以長時間維持肺部腫瘤組織的