2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:本研究擬通過建立新西蘭大白兔OSAHS模型及其下頜前移矯治器(MAD)的治療,研究OSAHS以及MAD治療對頦舌肌組織(GG)中NF–κB P65及炎癥細(xì)胞因子TNF–α和IL–6的影響。探討OSAHS對GG損害的可能炎性機(jī)制,為OSAHS導(dǎo)致GG損害的發(fā)病機(jī)理研究以及MAD治療OSAHS對GG影響的研究提供一定的理論基礎(chǔ)。
  方法:
  1.動(dòng)物分組:純種雄性新西蘭大白兔18只,6月齡,體重3.0kg~3.5kg。

2、隨機(jī)分為3組,每組6只,分別是:1)阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征組(Group OSAHS);2)下頜前移矯治器組(Group MAD)和3)正常對照組(control group)。
  2.動(dòng)物模型的建立:造模前將三組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物置于仰臥位,進(jìn)行上氣道螺旋CT掃描(美國LightspeedGE16層型螺旋CT機(jī))和多導(dǎo)睡眠監(jiān)測(美國邦德Monet型多導(dǎo)睡眠監(jiān)測系統(tǒng)),以排除先天性O(shè)SAHS或解剖性上氣道狹窄。1%戊巴比妥鈉對OS

3、AHS組和MAD組動(dòng)物行全身麻醉后,在距軟硬腭交界1.5cm處的軟腭黏膜下肌層注射聚丙烯酰胺水凝膠混合物2ml。注射完成后,應(yīng)用以上同樣方法拍攝上氣道螺旋 CT并進(jìn)行多導(dǎo)睡眠監(jiān)測,以確定OSAHS動(dòng)物模型建立成功。OSAHS動(dòng)物模型建立成功后,MAD組的OSAHS兔適應(yīng)3天后佩戴下頜前移矯治器(MAD)。MAD由自凝牙托粉和牙托水制作而成,用玻璃離子粘結(jié)劑粘固于上前牙。當(dāng)MAD戴入兔口內(nèi)后,其前斜面與上頜平面成60°角,導(dǎo)下頜前移3mm

4、~4mm,咬合打開2mm~3mm。建模完成后,應(yīng)用以上同樣方法拍攝上氣道螺旋CT并進(jìn)行多導(dǎo)睡眠監(jiān)測,以評估MAD的療效。
  3.仰臥位睡眠:建模完成后第4天,檢查實(shí)驗(yàn)動(dòng)物注射傷口,無破潰、無感染,進(jìn)食、進(jìn)水無異常。接下來的8周,每日上午按5ml/kg~6ml/kg的劑量對三組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)口腔灌注10%水合氯醛,使其仰臥位睡眠2小時(shí)~4小時(shí)。其余時(shí)間正常進(jìn)食﹑進(jìn)水﹑自由活動(dòng)。
  4.標(biāo)本的采集及處理:8周后,術(shù)前24小時(shí)禁食

5、禁水,經(jīng)耳緣靜脈以2ml/kg的劑量注射1%戊巴比妥鈉,對動(dòng)物行全身麻醉。將兔置于仰臥位并固定四肢,打開口腔后將舌抬起,逐層分離舌下筋膜、肌肉暴露頦舌肌,將頦舌肌的兩端固定后小心離斷,用預(yù)冷的生理鹽水沖洗表面血液,將每只兔的頦舌肌組織剪成大小、體積相似的兩塊,液氮速凍,–80℃凍存。
  5.頦舌肌(GG)細(xì)胞核中NF–κB P65蛋白的表達(dá)量測定:按照核蛋白提取試劑盒說明書抽提三組動(dòng)物GG中的核蛋白,然后用BCA法測定核蛋白的蛋

6、白濃度,確定蛋白上樣量。蛋白質(zhì)免疫印跡分析法(Western Blot)測定NF–κB P65蛋白相對于細(xì)胞核內(nèi)參蛋白—組蛋白3(Histone3, H3)的表達(dá)量。
  6.頦舌?。℅G)中炎癥細(xì)胞因子TNF–α和IL–6的濃度測定:按照兔腫瘤壞死因子α(TNF–α)和兔白細(xì)胞介素6(IL–6)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書測定三組動(dòng)物GG中的TNF–α和IL–6在波長為450nm下的吸光度值,按照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出炎癥

7、細(xì)胞因子TNF–α和IL–6的濃度。
  7.相關(guān)性分析:將三組動(dòng)物GG中NF–κB P65蛋白相對表達(dá)量與TNF–α和IL–6的濃度以及AHI、SaO2進(jìn)行相關(guān)性分析。
  結(jié)果:
  1.動(dòng)物的一般情況:建模3天后,各組動(dòng)物均能正常飲水、進(jìn)食、自由活動(dòng)。三組動(dòng)物在建模前、建模2周以及建模8周后的體重?zé)o明顯差異。它們在仰臥位睡眠時(shí),OSAHS組鼾聲明顯且不均勻,睡眠過程中易驚醒;MAD組部分呼吸音較重或輕微打鼾,基本

8、平穩(wěn);正常對照組呼吸均勻,狀態(tài)平穩(wěn)。
  2.上氣道螺旋CT結(jié)果:OSAHS組與MAD組、對照組比較,軟腭1/4點(diǎn)﹑1/2點(diǎn)和3/4點(diǎn)處上氣道矢狀向間隙及上氣道橫截面積均明顯減小,差異有顯著性;而MAD組較對照組上述指標(biāo)雖然減小,但差異無顯著性。
  3.多導(dǎo)睡眠監(jiān)測記錄:OSAHS組動(dòng)物與MAD組、對照組相比,呼吸暫停低通氣指數(shù)升高、血氧飽和度下降、睡眠效率減低,差異有顯著性;MAD組較對照組以上指標(biāo)的變化無顯著性差異。<

9、br>  4.頦舌?。℅G)細(xì)胞核中NF–κB P65蛋白相對表達(dá)量:OSAHS組、MAD組和正常對照組的NF–κB P65蛋白相對表達(dá)量分別為0.44±0.08、0.30±0.09、0.24±0.07。OSAHS組較MAD組、對照組明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;MAD組與對照組相比升高,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
  5.頦舌肌(GG)中TNF–α和IL–6的濃度:OSAHS組、MAD組和正常對照組的TNF–α濃度分別為96.80±18.0

10、0pg/ml、71.16±20.18pg/ml、64.80±19.51pg/ml。OSAHS組較MAD組、對照組明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;MAD組與對照組相比升高,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。OSAHS組、MAD組和正常對照組的 IL–6濃度分別為93.30±16.97pg/ml、69.25±14.28pg/ml、63.49±13.15pg/ml。OSAHS組較MAD組、對照組明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;MAD組與對照組相比升高,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

11、
  6.GG細(xì)胞核中NF–κB P65與TNF–α和IL–6相關(guān)性分析:NF–κB P65與TNF–α和IL–6濃度呈明顯正相關(guān),r值分別0.886、0.862,P值均為0.000。
  7.GG中NF–κB P65與AHI和SaO2相關(guān)性分析:NF–κB P65與AHI成正相關(guān),r值為0.722,P值為0.000;NF–κB P65與SaO2成負(fù)相關(guān),r值為–0.685,P值為0.000。
  結(jié)論:
  1

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