中草藥單體的抗腫瘤作用.pdf

1、目的：探討中草藥單體雷公藤內(nèi)酯酮(Triptonide,TN)對(duì)人肝癌細(xì)胞QGY-7703細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，探討中草藥單體木蝴蝶苷A(Oroxin A,OA)對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231細(xì)胞生長(zhǎng)和誘導(dǎo)細(xì)胞衰老的作用，并研究其作用機(jī)制。
　　方法：采用AlamarBlue方法檢測(cè)雷公藤內(nèi)酯酮對(duì)人肝癌細(xì)胞QGY-7703增殖的作用以及木蝴蝶苷A對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231增殖的作用；Giemsa染色法觀(guān)察TN對(duì)QGY-770

2、3細(xì)胞形態(tài)的影響，OA對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞形態(tài)的影響；PI染色法及流式細(xì)胞儀法觀(guān)察TN對(duì)QGY-7703細(xì)胞周期的影響以及OA對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞周期的影響；Western blot法檢測(cè)OA對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞周期相關(guān)蛋白和信號(hào)通路相關(guān)蛋白的影響；用衰老相關(guān)β-乳糖甘酶活性測(cè)定法(β-gal)檢測(cè)OA對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞衰老誘導(dǎo)作用；采用RT-PCR和Western blot法檢測(cè)OA誘導(dǎo)MDA-MB-231細(xì)

3、胞衰老相關(guān)基因和蛋白的作用；采用測(cè)定內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ER stress）的方法檢測(cè)OA引起MDA-MB-231細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激作用；采用細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)檢測(cè)法檢測(cè)OA對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞內(nèi)ROS的影響作用；免疫熒光法(IF)和激光共聚焦顯微鏡成像法觀(guān)察OA影響MDA-MB-231細(xì)胞的具體部位。
　　結(jié)果：
　　1.AlamarBlue實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，TN對(duì)人肝癌細(xì)胞QGY-7703表現(xiàn)出一定的增殖抑制作用，且72h的半

4、數(shù)抑制濃度為19.2nmol/l；PI單染示TN可將QGY-7703阻滯在G0/G1期。
　　2.AlamarBlue實(shí)驗(yàn)結(jié)果示：OA對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的增殖起較明顯抑制作用，72h的半數(shù)抑制濃度為16μmol/l；β-gal實(shí)驗(yàn)顯示OA可誘導(dǎo)MDA-MB-231細(xì)胞衰老；PI單染及Annexin-V雙染實(shí)驗(yàn)示OA可將細(xì)胞周期阻滯在G2/M期，并且在低劑量時(shí)不引起明顯的細(xì)胞凋亡；RT-PCR和Western blo

5、t的結(jié)果示OA可以明顯誘導(dǎo)增強(qiáng)MDA-MB-231細(xì)胞衰老相關(guān)基因p21的表達(dá)；免疫熒光結(jié)果示OA引起MDA-MB-231細(xì)胞的多核現(xiàn)象以及細(xì)胞骨架的改變；測(cè)定內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激實(shí)驗(yàn)表明OA可明顯誘導(dǎo)MDA-MB-231細(xì)胞內(nèi)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，并且通過(guò)Western blot方法測(cè)定ER stress相關(guān)抗體ATF4和GRP78的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)OA可以引起人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231細(xì)胞的ER stress相關(guān)抗體ATF4和GRP78的表達(dá)增高

6、；通過(guò)ROS測(cè)定實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)OA可以一定程度引起MDA-MB-231細(xì)胞內(nèi)ROS水平升高；信號(hào)通路實(shí)驗(yàn)顯示，OA明顯增加了MDA-MB-231細(xì)胞內(nèi)磷酸化的p38的表達(dá)；另外，OA對(duì)人外周血細(xì)胞以及其他腫瘤細(xì)胞(髓系白血病細(xì)胞，宮頸癌細(xì)胞)的增殖無(wú)明顯抑制作用，說(shuō)明OA對(duì)體外細(xì)胞毒副作用很小，且具有一定的選擇性。
　　結(jié)論：
　　1.TN能有效抑制人肝癌細(xì)胞QGY-7703細(xì)胞增殖，而對(duì)正常肝臟細(xì)胞和人正常外周血細(xì)胞無(wú)明顯作用