抗腫瘤中草藥貓人參的種質(zhì)鑒別及其與近緣種的活性比較研究.pdf

1、貓人參為華東地區(qū)治療各類(lèi)消化道腫瘤的習(xí)用中草藥，是目前本地區(qū)抗腫瘤處方中最多用的品種之一。目前中藥學(xué)及植物學(xué)專(zhuān)著多記載其原植物為對(duì)萼獼猴桃(又稱(chēng)鑷合獼猴桃)(Actinidia valvata Dunn)，但民間也有以大籽獼猴桃(A．macrosperma C.F.Liang)為貓人參的原植物，甚至認(rèn)為后者入藥療效更佳。而且因貓人參用量較大而野生資源有限，時(shí)常有同屬其它種類(lèi)如黑蕊獼猴桃(A．melanandra Franch)、小葉獼猴

2、桃(A．lanceolata Dunn)、中華獼猴桃(A．chinensisPlanch.)等混用為貓人參，影響了本品的品質(zhì)和療效。因此，當(dāng)務(wù)之急首先要確定正品貓人參的原植物，并準(zhǔn)確鑒別其與混淆品：其次貓人參的近緣種能否代用，以擴(kuò)大目前嚴(yán)重緊缺的藥源。基于此目的，本文考證了貓人參原植物，系統(tǒng)鑒別了貓人參及其混淆品，研究了貓人參有效部位HPLC圖譜與體外抗腫瘤活性，分析比較了貓人參及其混淆品的礦質(zhì)元素，確認(rèn)了貓人參貓草反應(yīng)的化學(xué)物質(zhì)。

3、 1、原植物考證 通過(guò)民間與市場(chǎng)調(diào)查、藥材性狀與原植物形態(tài)鑒定、文獻(xiàn)查閱，根據(jù)原植物形態(tài)、藥用歷史和學(xué)名發(fā)表時(shí)間，明確了正品貓人參的主要來(lái)源應(yīng)為大籽獼猴桃，而對(duì)萼獼猴桃可能只是其次要來(lái)源。 2、種質(zhì)鑒別 從原植物形態(tài)、生藥性狀、熒光反應(yīng)、紫外光譜、熒光光譜、傅立葉變換紅外光譜(FT-IR)、PCR-RFLP等角度系統(tǒng)地鑒別了大籽獼猴桃及其近緣種，尤其是形態(tài)相似而一直被認(rèn)為是貓人參原植物的對(duì)萼獼猴桃。大籽獼猴桃

4、與對(duì)萼獼猴桃等近緣種的形態(tài)差異主要在繁殖器官花果上，因此營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期較難鑒別。以生藥性狀為基礎(chǔ)，結(jié)合9種獼猴桃生藥的蒸餾水、乙醇、氯仿、石油醚提取液在254 nm、365 nm紫外光激發(fā)下的熒光顏色，4種提取液的紫光光譜，水提液和醇提液的熒光光譜，完全、準(zhǔn)確鑒別了9種藥用獼猴桃，編制了鑒定檢索表。9種獼猴桃紅外譜圖總體較相似，但中華獼猴桃和毛花獼猴桃有強(qiáng)烈末端吸收，明顯區(qū)別于其它7種獼猴桃，進(jìn)一步比較大籽獼猴桃等7種獼猴桃與中華獼猴桃紅外

5、譜圖的相減譜圖，完全區(qū)分了9種獼猴桃，編制了鑒定檢索表。限制性?xún)?nèi)切酶Ddel、DraI對(duì)大籽獼猴桃葉綠體trnK片段的酶切式樣具有特異性，建立了大籽獼猴桃的PCR-RFLP分子指紋圖譜，可有效鑒別貓人參混淆品的原植物。 3、體外抗腫瘤活性比較 體外抗腫瘤試驗(yàn)結(jié)果表明，大籽獼猴桃對(duì)供試的3種腫瘤細(xì)胞株均有較強(qiáng)的抑制作用，但敏感性存在差異，抑制效果為肝癌SMMC-7221(I<,50>=54.22μg/ml)>胃癌SGC-7

6、901(133.16μg/ml)>肺癌.A549(206.63μg/ml)。大籽獼猴桃和對(duì)萼獼猴桃對(duì)人肝癌細(xì)胞株SMMC-7221抑制活性差異顯著，后者(217.85μg/ml)僅為前者的1/4。異色獼猴桃、長(zhǎng)葉獼猴桃、毛花獼猴、小葉獼猴桃桃對(duì)SMMC-7221的抑制效果均顯著優(yōu)于大籽獼猴桃，尤其是小葉獼猴桃的IC<,50>達(dá)到6.53μg/ml，活性相當(dāng)于大籽獼猴桃的8倍，是本研究的重大發(fā)現(xiàn)，值得進(jìn)一步研究。在人胃癌細(xì)胞株SGC-79

7、01、人肺癌細(xì)胞株A549試驗(yàn)中，9種供試材料僅大籽獼猴桃和對(duì)萼獼猴桃有一定的抑制作用，而且二者活性相當(dāng)，差異不顯著。 基于活性分析結(jié)果，我們建議在治療胃癌和肺癌時(shí)，大籽獼猴桃和對(duì)萼獼猴桃活性接近，均可作貓人參入藥，其它種類(lèi)不宜混用；而治療肝癌時(shí)，大籽獼猴桃的活性明顯高于對(duì)萼獼猴桃，對(duì)萼獼猴桃不宜作貓人參入藥，或者至少須用量加倍，驗(yàn)證了富陽(yáng)草藥醫(yī)認(rèn)為“白貨”對(duì)萼獼猴桃藥效不及“紅貨”大籽獼猴桃，需加倍使用的說(shuō)法。 結(jié)合H

8、PLC圖譜和體外抗腫瘤活性結(jié)果，推測(cè)貓人參中起抗腫瘤作用的有效組分可能并不是其含量最高的幾個(gè)成分，而可能是本實(shí)驗(yàn)條件下吸收強(qiáng)度較弱、分離度不佳的化合物。本試驗(yàn)的HPLC圖譜仍需進(jìn)一步改進(jìn)洗脫條件，改善圖譜，以更加真實(shí)地反映乙酸乙酯部位的化學(xué)成分組成。 4、礦質(zhì)元素分析 礦質(zhì)元素(包括微量元素)與有效成分是中藥氣味的兩大物質(zhì)基礎(chǔ)，采用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法(ICP-AES)測(cè)定、比較了貓人參及其混淆品和浙江地區(qū)常見(jiàn)

9、的其它藥用獼猴桃的礦質(zhì)元素含量。目前公認(rèn)的與腫瘤發(fā)生、發(fā)展有關(guān)的微量元素有Cu、Zn、se、Fe。大籽獼猴桃Cu、Zn含量顯著高于其它8種獼猴桃，而Se含量較低，F(xiàn)e含量中等，說(shuō)明貓人參的抗腫瘤作用還可能與高含量的Cu、zn有關(guān)?；诘V質(zhì)元素的聚類(lèi)圖(加大了Cu、Fe、Se、Cu的權(quán)重)表明，大籽獼猴桃與其它8種獼猴桃均有較大差異，因此從抗腫瘤微量元素含量的角度，其它種類(lèi)獼猴桃代用大籽獼猴桃作貓人參似乎并不適宜。 5、貓草反應(yīng)研