鞘蕊蘇芳樟醇合成酶基因克隆與其花粉活力測(cè)定.pdf

1、鞘蕊蘇藥材為唇形科植物毛喉鞘蕊花（Coleus forskohlii(Wild)Briq）的干燥全草，主產(chǎn)于印度、斯里蘭卡等熱帶地區(qū)，我國(guó)云南、福建等省亦有少量分布，被植物學(xué)家界定為稀有物種。民間將鞘蕊蘇用于治療哮喘、腫瘤等疾患，療效顯著，稱為“神藥”。因此湖北福人藥業(yè)公司將其開(kāi)發(fā)為“鞘蕊蘇膠囊”中藥新品種。為解決鞘蕊蘇膠囊產(chǎn)業(yè)化所需原料藥材供求問(wèn)題，湖北福人藥業(yè)公司與本實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)學(xué)研結(jié)合將其從云南移植湖北通城縣種植。芳樟醇為鞘蕊蘇有效成

2、分，本論文對(duì)其合成酶基因進(jìn)行了調(diào)控研究，并對(duì)鞘蕊蘇花粉形態(tài)及其活力測(cè)定進(jìn)行了較系統(tǒng)的生藥學(xué)研究，從而為該藥材規(guī)范化種植和培育優(yōu)良種質(zhì)提供了科學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　采用通城縣種植鞘蕊蘇為研究對(duì)象，提取總RNA，構(gòu)建芳樟醇合成酶基因模板，并以一代測(cè)序所得基因片段設(shè)計(jì)擴(kuò)增引物，通過(guò)RACE分子生物學(xué)技術(shù)分析研究獲得鞘蕊蘇芳樟醇合成酶基因全長(zhǎng)。研究結(jié)果表明，鞘蕊蘇芳樟醇合成酶基因全長(zhǎng)為1791bp，氨基酸數(shù)目為597個(gè)，屬于異戊二烯家族。

3、r>　　以芳樟醇合成酶基因全長(zhǎng)設(shè)計(jì)引物，并加入HindⅢ和SalⅠ酶切位點(diǎn)，采用PCR技術(shù)將擴(kuò)增產(chǎn)物連接Pet28a載體，構(gòu)建重組表達(dá)載體，再將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌表達(dá)菌株 BL21(DE3)之中，利用 IPTG誘導(dǎo)后獲得目的蛋白，與預(yù)測(cè)蛋白分子量68KDa一致，最后通過(guò)蛋白提純?cè)噭┖刑崛〖兓康牡鞍?。本?xiàng)研究為芳樟醇合成酶基因調(diào)控進(jìn)一步深入研究奠定了良好基礎(chǔ)。
　　采用現(xiàn)代生藥學(xué)研究技術(shù)，對(duì)鞘蕊蘇藥材花粉的形態(tài)結(jié)構(gòu)、生長(zhǎng)條件