煙草煙霧對(duì)人巨噬細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響及紅霉素的作用.pdf

1、目的：探討煙草煙霧對(duì)人巨噬細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響及紅霉素（Erythromycin,EM）的作用。
　　方法：體外培養(yǎng)人類單核細(xì)胞系U937細(xì)胞，用佛波脂（Phorbol12-myristate13-acetate,PMA，10ng/ml）誘導(dǎo)分化人巨噬細(xì)胞，用煙草煙霧提取物（Cigarette Smoke Extract,CSE）處理人巨噬細(xì)胞或EM預(yù)處理后用CSE刺激人巨噬細(xì)胞，將細(xì)胞分組：空白對(duì)照組；?CSE組（加入1％CSE孵

2、育24小時(shí)）；CSE+EM24h組（1μg/ml紅霉素預(yù)孵育24h后，加入1%CSE繼續(xù)孵育24小時(shí)）；CSE+EM48h組（1μg/ml紅霉素預(yù)孵育48h后，加入1%CSE繼續(xù)孵育24小時(shí)）。取孵育后各組細(xì)胞經(jīng)預(yù)包埋、固定、漂洗、脫水、滲透、聚合、修塊、切片后，經(jīng)醋酸鈾及檸檬酸鉛染色后，用電子顯微鏡觀察各處理組細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。取各組上清液分別離心去除沉淀后，避光加入2',7'-二氯二氫熒光素二乙酯（2’,7’-dichlorofluor

3、escin-diacetat，DCFH-DA），使其濃度為10uM，37℃下避光孵育30分鐘后，立即予熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)各組熒光強(qiáng)度。
　　結(jié)果：⑴各組人巨噬細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的觀察空白對(duì)照組：細(xì)胞圓或橢圓形，細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)少許線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及溶酶體。絕大多數(shù)表面有許多微絨毛樣突起，核偏心位，呈圓形或橢圓形，少數(shù)呈不規(guī)則形，染色質(zhì)聚積于核膜下。CSE組：與空白對(duì)照組比較，煙草煙霧組中細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)不僅可見(jiàn)溶酶體、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)量明顯增多，

4、亦出現(xiàn)線粒體嵴排列紊亂，嵴斷裂逐漸崩解形成空泡（線粒體空泡化改變）、線粒體基質(zhì)電子密度增高濃聚，次級(jí)溶酶體與初級(jí)溶酶體同時(shí)存在，甚至可見(jiàn)多個(gè)溶酶體聚集融合、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張的、細(xì)胞內(nèi)基質(zhì)較濃聚，即粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆?，F(xiàn)象較明顯。CSE+EM組：與CSE組比較，線粒體數(shù)量減少，未見(jiàn)空泡化改變，溶酶體數(shù)量減少，未見(jiàn)次級(jí)溶酶體，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)量減少、無(wú)擴(kuò)張，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆粒現(xiàn)象較CSE組減少。⑵CSE刺激及EM干預(yù)對(duì)人巨噬細(xì)胞活性氧（Reactive

5、 Oxygen Species,ROS）釋放量的影響：CSE組ROS釋放量明顯高于空白對(duì)照組（P<0.05），CSE+EM24h組ROS釋放量較CSE組減少（P<0.05），CSE+EM48h組ROS釋放量明顯減少（P<0.05）。
　　結(jié)論：①煙草煙霧刺激人巨噬細(xì)胞引起細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變，表現(xiàn)為線粒體的腫脹及空泡化改變，溶酶體數(shù)量的增多，出現(xiàn)多個(gè)溶酶體聚集融合，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張及脫顆?，F(xiàn)象；而紅霉素預(yù)處理后可改善線粒體腫脹及空泡化