擬果蠅細(xì)胞系建立及6種果蠅PVR基因的分子系統(tǒng)學(xué)研究.pdf

1、擬果蠅細(xì)胞系的建立：以擬果蠅早期胚胎為材料，采用常規(guī)方法獲取發(fā)育4-6h的果蠅胚胎細(xì)胞，用改良的M3(BF)培養(yǎng)液體外培養(yǎng)，經(jīng)50d左右的原代培養(yǎng)，當(dāng)小細(xì)胞長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿后進(jìn)行傳代培養(yǎng)，以后平均每隔10d傳代一次。在細(xì)胞系傳至10代左右時(shí)按照細(xì)胞系建立標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)細(xì)胞系的一系列生物學(xué)特性。結(jié)果顯示：24h后細(xì)胞貼壁，開(kāi)始分化，先后依次觀察到肌肉細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞，脂肪細(xì)胞，鱗狀上皮細(xì)胞，血囊細(xì)胞的分化。2個(gè)月后所有這些分化的細(xì)胞都逐漸消失，只剩下生

2、長(zhǎng)較為一致的圓形小細(xì)胞。當(dāng)圓形小細(xì)胞長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿時(shí)進(jìn)行傳代。經(jīng)液氮凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后活性達(dá)90％以上。細(xì)胞維持體外生長(zhǎng)將近2年，傳至60代，是一株成功的擬果蠅細(xì)胞系，命名為L(zhǎng)JY-SIM。
　　 6種果蠅PVR基因的分子系統(tǒng)學(xué)研究：通過(guò)PCR擴(kuò)增和克隆測(cè)序的方法，獲得了黑腹果蠅種亞組內(nèi)的6個(gè)種的PVR基因的序列。以細(xì)針果蠅(Drosophila eugracils)為外群，運(yùn)用鄰接法，最大似然法和貝葉斯法三種方法構(gòu)建了melanog

3、aster種亞組的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，對(duì)其系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系進(jìn)行了分析，并利用bootstrap對(duì)分析結(jié)果進(jìn)行了置信度檢驗(yàn)。分子進(jìn)化分析表明：這個(gè)基因的編碼區(qū)段高度保守，明顯表現(xiàn)出受到純化選擇的痕跡，其超高的Ks/Ka比值及GCIII含量都充分顯示如此。而這個(gè)基因的內(nèi)含子區(qū)存在明顯的插入和缺失，包含有豐富的進(jìn)化信息?；驑?shù)表明：D.melanogaster最先分化出來(lái)，然后是D.simulans和D.mauritiana，接著是，它們聚為單獨(dú)的一個(gè)亞