擴(kuò)張型心肌病差異蛋白表達(dá)及蛋白生物標(biāo)志物研究.pdf

1、擴(kuò)張型心肌病(dilated cardiomyopathy，DCM)是原發(fā)性心肌病(primary cardiomyopathy，PCM)中最常見的一種類型，其病因和發(fā)病機(jī)制尚不明確，主要特征為左心室（多數(shù)）和（或）右心室擴(kuò)大和心肌收縮功能障礙，伴或不伴有心律失常、充血性心力衰竭，可并發(fā)栓塞甚至猝死等[1-7]，是導(dǎo)致慢性心力衰竭的主要病因之一。有文獻(xiàn)報(bào)道，在我國DCM的發(fā)病率為13/10萬～84/10萬，男性多于女性(2.5∶1)，其

2、中，家族性擴(kuò)張型心肌病(family dilatedcardiomyopathy，F(xiàn)DCM)占2.25％～8.8％[5]，發(fā)病以青壯年較為多見，65歲以上老年人發(fā)病率為1％[7]。DCM患者如能及時(shí)得到診斷治療，患者將在很大程度上減少相應(yīng)的醫(yī)療費(fèi)用以及致命性事件的發(fā)生。然而，由于DCM仍缺乏特異性的診斷指標(biāo)，截至目前，DCM的早期診斷仍缺乏敏感特異、方便快捷的診斷方法，其診斷主要根據(jù)患者的臨床表現(xiàn)以及X線檢查、心電圖(electroca

3、rdiogram，ECG)檢查、超聲心動(dòng)圖檢查等相關(guān)輔助檢查等情況，做出的排除性診斷，即需要排除風(fēng)濕性心臟病、高血壓性心臟病、繼發(fā)性心肌病、冠心病、先天性心臟病、心肌炎、克山病(Keshan disease，KD)等有關(guān)疾病后才能診斷DCM。
　　近年來，蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域的研究取得了突飛猛進(jìn)的發(fā)展，技術(shù)日趨成熟[8-10]。目前，通過應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)已在腫瘤[11-13]、骨關(guān)節(jié)病[14-15]等患者的組織液和組織中尋找到相應(yīng)

4、的蛋白生物標(biāo)志物，為腫瘤、骨關(guān)節(jié)病等相關(guān)疾病的診斷和鑒別診斷提供了準(zhǔn)確可靠、方便快捷的新方法。然而，迄今為止，還沒有利用新近發(fā)展的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)從DCM、KD等心肌病患者血清中尋找到相關(guān)的血清蛋白生物標(biāo)志物的準(zhǔn)確報(bào)道。為此，我們進(jìn)行了DCM患者、KD患者以及健康人血清蛋白生物標(biāo)志物的研究，期望通過應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，篩選出DCM的血清蛋白生物標(biāo)志物，建立DCM診斷以及鑒別診斷的判別模型。
　　目的:
　　通過應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技

5、術(shù)尋找DCM血清蛋白生物標(biāo)志物，建立DCM診斷以及鑒別診斷的判別模型，為DCM的診斷、鑒別診斷，提供新的、方便快捷的方法，為DCM的早期發(fā)現(xiàn)、早期預(yù)防、早期診斷以及早期治療開拓新的途徑。
　　方法:
　　選擇在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院、濟(jì)南市中心醫(yī)院和濟(jì)南市第一人民醫(yī)院心內(nèi)科住院的29例DCM患者作為DCM組;選擇內(nèi)蒙古、山東及四川等3省份（自治區(qū)）KD病區(qū)的32例慢型KD患者作為KD組;并以濟(jì)南市當(dāng)?shù)亟】等?0例作為健康對(duì)照組。取

6、受檢者血清，應(yīng)用液體芯片飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)(ClinProtTM MALDI-TOF-MS)檢測(cè)受檢者血清差異蛋白，使用ClinProTools2.2獲取蛋白峰數(shù)據(jù)，并采用遺傳、快速分類和神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)等3種算法篩選血清生物標(biāo)志物，建立ClinPrott判別模型。
　　結(jié)果:
　?、俳?jīng)檢測(cè)DCM組、健康對(duì)照組2組受試對(duì)象的血清樣本，共獲得蛋白質(zhì)/多肽有效峰圖73個(gè)，其中有57個(gè)差異蛋白/多肽，與健康對(duì)照組比較，DCM組有35個(gè)差異蛋

7、白/多肽上調(diào)，22個(gè)差異蛋白/多肽下調(diào)。篩選出質(zhì)荷比(mass-to-charge ratio, m/z)值為4247.95、4209.37、1058.69、1074.78、2364.71的5個(gè)蛋白質(zhì)/多肽作為血清生物標(biāo)志物，經(jīng)驗(yàn)證ClinPrott判別模型的敏感性與特異性分別為99.14％、99.16％。
　?、诮?jīng)檢測(cè)DCM組、KD組等2組受試對(duì)象的血清樣本，共獲得蛋白質(zhì)/多肽有效峰圖61個(gè)，其中有49個(gè)差異蛋白/多肽，與KD組

8、比較，DCM組有22個(gè)差異蛋白/多肽上調(diào)，27個(gè)差異蛋白/多肽下調(diào)。篩選出質(zhì)荷比(m/z)值為4049.27、3947.99、7927.06、1450.35、5917.11的5個(gè)蛋白質(zhì)/多肽作為血清生物標(biāo)志物，經(jīng)驗(yàn)證ClinPrott判別模型的敏感性與特異性分別為99.17％、99.19％。
　　結(jié)論:
　?、貲CM患者與健康人群比較，DCM患者血清蛋白差異表達(dá);篩選出的質(zhì)荷比(m/z)為4247.95、4209.37、10