激光拉曼光譜系統(tǒng)下實(shí)時、非標(biāo)記監(jiān)測胰島β細(xì)胞胞吐活動的研究.pdf

1、目的：在單細(xì)胞水平上實(shí)時監(jiān)測胰島β細(xì)胞胞外分泌胰島素活動既往主要有以下傳統(tǒng)的電生理學(xué)方法，如通常需要侵入性微電極穿刺或熒光蛋白標(biāo)記的全內(nèi)反射成像技術(shù)和雙光子成像技術(shù)。本研究通過利用激光鑷子拉曼光譜儀從胰島β細(xì)胞邊緣附近的區(qū)域捕獲胞吐活動可能產(chǎn)生的拉曼散射信號，證實(shí)拉曼光譜系統(tǒng)能夠?qū)崟r監(jiān)測胰島β細(xì)胞胰島素的胞吐活動，并建立拉曼光譜系統(tǒng)下細(xì)胞胞吐觀察的實(shí)驗(yàn)體系。
　　方法：本研究通過將高濃度葡萄糖、氯化鉀作為刺激組，刺激胰島β細(xì)胞胞外

2、分泌胰島素；而低濃度的葡萄糖和鈣通道阻滯劑（硝苯地平）分別作為空白對照組和條件對照組。單細(xì)胞水平上應(yīng)用：激光鑷子拉曼光譜儀從細(xì)胞邊緣附近的區(qū)域捕獲可能的拉曼光譜散射信號；FM1-43染料鑒定胰島β細(xì)胞胞吐位點(diǎn)。群體細(xì)胞水平上應(yīng)用：放射免疫法測胰島素含量，從而推測胰島素分泌情況。
　　結(jié)果：單細(xì)胞水平上：刺激前各實(shí)驗(yàn)組之間光譜信號差異無統(tǒng)計學(xué)意義；加入處理因素后，從刺激組細(xì)胞邊緣捕獲到的有意義的拉曼光譜信號不僅頻率比空白對照組和條件

3、對照組多，而且光譜信號強(qiáng)度較強(qiáng)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；FM1-43染料染色后刺激組的細(xì)胞熒光強(qiáng)度較空白對照組和條件對照組強(qiáng)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，而高糖組與氯化鉀組之間熒光強(qiáng)度無統(tǒng)計學(xué)意義。群體細(xì)胞水平上：刺激前各實(shí)驗(yàn)組胰島素分泌量差異無統(tǒng)計學(xué)意義，加入處理因素后刺激組胰島素分泌量較空白對照組和條件對照組多，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，且與時間沒有關(guān)聯(lián)性。結(jié)合胰島β細(xì)胞細(xì)胞膜和胰島素的拉曼光譜信號進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)本研究所捕抓的拉曼光譜信號類似于胰島β