青-老年大鼠腎臟交互移植模型的構(gòu)建及機(jī)體內(nèi)環(huán)境衰老關(guān)鍵因子的研究.pdf

1、目的:
　　通過(guò)建立青年-老年大鼠腎臟交互移植模型，觀察內(nèi)環(huán)境對(duì)腎臟衰老的影響。應(yīng)用非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法篩選與衰老顯著相關(guān)蛋白，驗(yàn)證并探討其對(duì)衰老影響的可能作用機(jī)制。
　　方法:
　?、偻ㄟ^(guò)腎臟原位切除和供腎原位移植術(shù)方法，把年輕大鼠的腎臟移植到年老大鼠，同時(shí)把年老大鼠的腎臟移植到年輕大鼠，術(shù)后體內(nèi)生長(zhǎng)6個(gè)月后，建立青年-老年大鼠腎臟交互移植模型;②觀察交互移植后腎臟病理（HE、PAS染色）、組織衰老（β-gal染

2、色）、炎癥因子（TNF-α和IL-1β）的變化情況;③用差異蛋白質(zhì)組分析篩選參與腎臟衰老的蛋白，并在Wi38細(xì)胞進(jìn)行驗(yàn)證其參與細(xì)胞衰老的作用通路。
　　結(jié)果:
　?、俪晒⑶嗄?老年大鼠腎臟交互移植模型，移植后腎臟血運(yùn)正常，腎臟移植后存活;②與青年大鼠腎臟比較，移植到老年大鼠的青年腎臟HE染色、PAS染色腎臟病理無(wú)明顯改變，β-gal染色增加，炎癥因子TNF-α和IL-1β表達(dá)增加;與老年大鼠腎臟比較，移植到青年大鼠的老年

3、腎臟HE染色、PAS染色腎臟病理無(wú)明顯改變，β-gal染色降低，炎癥因子TNF-α和IL-1β表達(dá)降低;③蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)比較腎臟移植各組的差異表達(dá)蛋白，共鑒定到了279個(gè)差異倍數(shù)2以上的差異蛋白。最終篩選出16個(gè)有與ATP能量代謝、凋亡、細(xì)胞死亡有關(guān)的蛋白質(zhì)，蛋白-蛋白相互作用分析提示Sod1與多個(gè)蛋白有相互作用。與20代Wi38細(xì)胞比較，40代Wi38細(xì)胞Sod1表達(dá)降低、p16表達(dá)升高。Sod1過(guò)表達(dá)時(shí)，Ac-NF-κB表達(dá)降低，細(xì)