廣西巴馬長(zhǎng)壽地區(qū)不同年齡人群腸道菌群分析.pdf

1、人體腸道的微生態(tài)平衡是由腸道中巨大的微生物庫(kù)與人體之間構(gòu)成的，使得人體處在一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡之中，從而保證機(jī)體正常的生理活動(dòng)。若這種平衡被破壞，菌群出現(xiàn)失調(diào)，將會(huì)引發(fā)大量相關(guān)疾病。研究表明，在宿主與腸道微生物共同進(jìn)化的過(guò)程中，宿主內(nèi)在因素或外在環(huán)境因素共同影響著腸道菌群的定植能力及其組成的多樣性，從而影響腸道菌群的平衡。目前，腸道菌群與宿主年齡之間的關(guān)系尚不明確，但宿主的年齡又是影響長(zhǎng)壽家族腸道菌群結(jié)構(gòu)組成的一個(gè)主要因素。因此本研究征集了世界

2、長(zhǎng)壽鄉(xiāng)廣西巴馬鎮(zhèn)不同年齡的健康人群共計(jì)28名志愿者，并應(yīng)用微生物純培養(yǎng)法、變性梯度凝膠電泳(Denaturinggradient gel electrophoresis，DGGE)與實(shí)時(shí)熒光定量(Real time PCR, RT-PCR)相結(jié)合的方法來(lái)研究年齡因素對(duì)廣西巴馬志愿者腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響，為研究人類年齡與腸道菌群的相關(guān)性提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:
　　1.從世界長(zhǎng)壽鄉(xiāng)廣西巴馬鎮(zhèn)所轄3個(gè)村采集長(zhǎng)壽家族人群的糞便樣品

3、28份，利用選擇性培養(yǎng)基研究了糞便樣品中分離的乳酸菌數(shù)量，并通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)研究其耐酸耐膽鹽及抑菌能力;根據(jù)年齡將樣品分為4組，青少年組、中年組、老年組和長(zhǎng)壽組。結(jié)果表明，從28份樣品中共分離出1273株菌株，通過(guò)生理生化試驗(yàn)將1178株菌初步鑒定為乳酸菌;其中，青少年組糞便樣品中乳酸菌數(shù)量最多，為9.16±0.18 lgcfu/g，隨著年齡的增長(zhǎng)，乳酸菌數(shù)量逐漸減少，中年組和老年組分別為8.93±0.35 lgcfu/g和8.67±0.3

4、5 lgcfu/g，但是長(zhǎng)壽組乳酸菌數(shù)量還是保持著一個(gè)較高的水平，為8.89±0.48 lgcfu/g;中年組與老年組糞便樣品中分離的乳酸菌在pH為3的人工胃液中的存活率相當(dāng)，分別為40.85±3.27％和37.26±2.32％，顯著高于青少年組和長(zhǎng)壽組(P＜0.05)，其中長(zhǎng)壽組腸道乳酸菌耐受胃液能力最差，為28.26±3.85％;不同年齡組的乳酸菌在含0.5％耐膽鹽和pH為6.8的人工腸液中的存活率無(wú)顯著性差異;青少年組和中年組分離

5、的乳酸菌抑制大腸桿菌的能力顯著高于老年組和長(zhǎng)壽組(P＜0.05)，抑菌圈直徑分別為18.67±0.98mm和17.98±0.71mm，而長(zhǎng)壽組分離的乳酸菌抑制金黃色葡萄球菌能力略低于青少年組和中年組，但顯著高于老年組，抑菌圈直徑為15.41±1.48mm。
　　2.應(yīng)用PCR-DGGE技術(shù)研究了巴馬長(zhǎng)壽村不同年齡人群腸道菌群的差異。結(jié)果表明，青少年組、老年組和長(zhǎng)壽組各組間腸道中的優(yōu)勢(shì)菌群親緣性較低，主要差異性菌株是:普通擬桿菌、瘤

6、胃球菌、青春雙歧桿菌、產(chǎn)黑色普雷沃菌、梭菌、不可培養(yǎng)細(xì)菌、鮑氏不動(dòng)桿菌、酸微菌屬、表皮葡萄球菌、干酪乳桿菌、挑剔真桿菌和福氏埃希桿菌，但是各年齡組內(nèi)的腸道中的優(yōu)勢(shì)菌群親緣性較高;青少年組和長(zhǎng)壽組組間腸道中的擬桿菌親緣性較高，中年組和老年組組間親緣性較高，青少年組和長(zhǎng)壽組與中年組和老年組之間親緣性較低，主要差異性菌株是:普通擬桿菌、類桿菌屬、不可培養(yǎng)菌、多形擬桿菌、吉氏擬桿菌、福賽斯坦納菌和脆弱擬桿菌，青少年組、中年組和長(zhǎng)壽組組內(nèi)腸道中的

7、擬桿菌親緣性較高;青少年組和長(zhǎng)壽組組間腸道中的柔嫩梭菌親緣性較高，與中年組和老年組親緣性低，且中年組和老年組組間親緣性較低，主要差異菌株是:瘤胃菌屬、熱纖梭菌、解纖維素梭菌、梭狀芽胞桿菌、不可培養(yǎng)菌、巴斯德梭菌、化糖梭狀芽胞桿菌，青少年組和中年組組內(nèi)親緣性低，老年組和長(zhǎng)壽組組內(nèi)親緣性高;四個(gè)年齡組組間腸道中的雙歧桿菌親緣性都較高，主要差異菌株是:兩歧雙岐桿菌、嗜熱雙歧桿菌、長(zhǎng)雙歧桿菌、短雙歧桿菌、動(dòng)物雙歧桿菌、不可培養(yǎng)雙歧桿菌、齒雙歧桿

8、菌和青春雙歧桿菌，四個(gè)年齡組組內(nèi)腸道中的雙歧桿菌親緣性都較高;青少年組和長(zhǎng)壽組組間腸道中的乳酸桿菌親緣性較高，與中年組和老年組親緣性低，且中年組和老年組組間親緣性較高，主要差異菌株是:瑞士乳桿菌、瘤胃乳桿菌、羅伊乳桿菌、格氏乳桿菌、鼠李糖桿菌、發(fā)酵乳桿菌、嗜酸乳桿菌、唾液乳桿菌、布赫內(nèi)氏乳桿菌、植物乳桿菌和約氏乳桿菌，四個(gè)年齡組組內(nèi)腸道中的乳酸桿菌親緣性都較高。
　　3.應(yīng)用RT-PCR技術(shù)研究巴馬長(zhǎng)壽村不同年齡人群腸道菌群的差異

9、。結(jié)果表明，中年組、長(zhǎng)壽組及老年組腸道中腸桿菌數(shù)量分別為8.16±0.29lgcopies/g、7.93±0.57 lgcopies/g及7.89±0.42lgcopies/g，其中中年組顯著高于青少年組的7.46±0.32 lgcopies/g(P＜0.05);中年組和老年組腸道中的腸球菌的數(shù)量分別為7.06±0.44 lgcopies/g、7.89±0.33lgcopies/g，均顯著高于青少年組的7.06±0.44lgcopies

10、/g和長(zhǎng)壽組的6.93±0.37lgcopies/g(P＜0.05);青少年組和中年組腸道中的柔嫩梭菌數(shù)量分別是9.06±0.44lgcopies/g、8.91±0.17lgcopies/g，均顯著高于老年組的8.42±0.23lgcopies/g和長(zhǎng)壽組的8.13±0.26lgcopies/g(P＜0.05);長(zhǎng)壽組和青少年組腸道中的乳桿菌數(shù)量分別為8.63±0.38lgcopies/g和8.36±0.48lgcopies/g，其中長(zhǎng)

11、壽組顯著高于中年組的7.85±0.21 lgcopies/g和老年組的7.98±0.22lgcopies/g(P＜0.05);青少年組和長(zhǎng)壽組腸道中的擬桿菌數(shù)量分別為9.76±0.35lgcopies/g、9.53±0.28lgcopies/g，其中青少年組顯著高于中年組的9.23±0.17lgcopies/g及老年組的8.92±0.32lgcopies/g（P＜0.05）;長(zhǎng)壽組和青少年組腸道中的雙歧桿菌數(shù)量分別為10.52±0.39