乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者血清PF4、VEGF蛋白表達(dá)的臨床意義.pdf

1、目的:乳腺癌是一種血管依賴性實(shí)體腫瘤，它的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移與血管新生密切相關(guān)，血管新生受到一系列血管生成調(diào)節(jié)因子的作用，這些因子控制著血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)。血小板第4因子(platelet factor-4，PF4)是一種血小板衍生因子，具有抑制血管生成的作用。研究證實(shí)PF4通過(guò)抗血管生成作用，抑制腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，但其在乳腺癌中的表達(dá)國(guó)內(nèi)外少有報(bào)道。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor, VE

2、GF)是一種強(qiáng)有力的，最具特征性的促血管生成因子，在乳腺癌的發(fā)生、生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中起重要作用。腫瘤組織和外周血中VEGF水平可以作為腫瘤診斷及評(píng)估預(yù)后的指標(biāo)。檢測(cè)外周血中VEGF的水平更方便，更易于臨床應(yīng)用。CD31即血小板內(nèi)皮粘附因子，可以標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞，用來(lái)檢測(cè)微血管密度(microverssel density, MVD)，能定量反映乳腺癌組織的血管生長(zhǎng)情況。本研究通過(guò)檢測(cè)血清中PF4、VEGF濃度及組織中MVD-CD31表達(dá)，

3、來(lái)了解PF4、VEGF及MVD-CD31在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者中的變化規(guī)律，探討它們之間及與其他各臨床病理特征的關(guān)系。
　　方法:
　　1研究對(duì)象:選取2014年1月-2014年7月在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院乳腺中心就診，經(jīng)空芯針穿刺，病理證實(shí)為乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者60例，均為原發(fā)性單側(cè)、未接受過(guò)化療、放療、內(nèi)分泌治療和分子靶向治療，既往無(wú)腫瘤病史的患者。術(shù)前抽取空腹靜脈血2ml，1000r/min離心3分鐘，取上層血清置-80

4、℃冰箱中保存待檢測(cè)。組織標(biāo)本在離體30分鐘內(nèi)取腫瘤組織、10％中性福爾馬林固定，石蠟包埋待檢測(cè)。同法用30例乳腺良性疾病（乳腺腺病、纖維腺瘤等）患者的血清和乳腺組織作對(duì)照。以上樣本的采集均通過(guò)河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院倫理委員會(huì)審批。
　　2用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清中PF4、VEGF蛋白表達(dá)，采用美國(guó)全自動(dòng)酶標(biāo)檢測(cè)儀VERSAmax，30分鐘內(nèi)在波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔OD值。根據(jù)OD值繪制Log-logit雙對(duì)

5、數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，使用logit-log或四參數(shù)數(shù)據(jù)處理模式（采用SOFTmaxPRO4.3LS分析軟件），由電腦自動(dòng)計(jì)算得出血清PF4，VEGF結(jié)果。
　　3組織切片采用免疫組化SP法染色，經(jīng)抗原熱修復(fù)，加入一抗，4℃過(guò)夜;加入二抗，室溫孵育30min;加入三抗;DAB顯色;復(fù)染，封片。ER、PR的判讀參照2010年ASCO/CAP指南。HER-2的判讀參照2007年ASCO/CAP指南。MVD-CD31的MVD判讀參照Weidner

6、等報(bào)道的方法。
　　4統(tǒng)計(jì)分析:采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)方差齊性檢驗(yàn)均符合正態(tài)分布，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn)，三組間均數(shù)比較用方差分析，兩兩比較用LSD法。相關(guān)性分析使用Person檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者和對(duì)照組血清PF4濃度分別為0.354±0.198ng/ml和0.225±0.436ng/ml，二

7、者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P=0.006。乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者和對(duì)照組血清VEGF濃度分別為15.458±15.819pg/ml和7.727±8.307pg/ml，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P=0.046。乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者和對(duì)照組MVD-CD31分別為16.58±9.528和10.40±3.050，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P=0.005。
　　2乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者血清PF4、VEGF之間有顯著的相關(guān)性，為正相關(guān)，r=0.693，P=0.

8、000。血清PF4與MVD-CD31表達(dá)無(wú)相關(guān)性，r=0.01，P=0.947。血清VEGF與MVD-CD31表達(dá)無(wú)相關(guān)性，r=-0.075， P=0.605。
　　3有脈管瘤栓患者的血清PF4表達(dá)為0.233±0.089ng/ml，低于無(wú)脈管瘤栓者0.396±0.209ng/ml，二者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P=0.009。血清PF4與患者月經(jīng)狀況、腫瘤的大小、TNM分期、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移、ER、PR、HER-2表達(dá)均無(wú)相關(guān)性，

9、差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05。
　　4血清VEGF與患者月經(jīng)狀況無(wú)相關(guān)性、血清VEGF與腫瘤的大小、TNM分期、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移、有無(wú)脈管瘤栓、ER、PR、HER-2表達(dá)均無(wú)相關(guān)性，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05。
　　5 MVD-CD31在直徑＞2cm的腫瘤組織中表達(dá)為21.080±9.358，明顯高于直徑≤2cm的腫瘤中的12.080±7.455，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P=0.000。隨著腫瘤TNM分期增高組

10、織中MVD-CD31表達(dá)也增高（9.863±5.985，15.304±8.646，22.776±8.348），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，F(xiàn)=2.983，P=0.002。MVD-CD31與患者月經(jīng)狀況、組織學(xué)分級(jí)、有無(wú)脈管瘤栓、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移、ER、PR、HER-2表達(dá)均無(wú)相關(guān)性，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05。
　　結(jié)論:
　　1 PF4、VEGF在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者血清中濃度明顯高于對(duì)照組，可以成為鑒別乳腺良、惡性疾病的重要指