microRNA-212在乳腺浸潤性導管癌組織中的表達及意義.pdf

1、MicroRNAs(miRNAs，miR)是一種長度一般為18至25個核苷酸的高度保守的內源性單鏈小分子RNA。MiRNAs不起到編碼蛋白質的作用，但可以通過與特定目的基因mRNA的3'非翻譯區(qū)序列互補結合，從而起到抑制mRNA的翻譯過程或者直接致使其降解而調節(jié)下一步的生物學作用。自發(fā)現(xiàn)miRNAs之后，其在眾多領域中被廣泛研究。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個多基因作用的過程，而miRNAs由于其本身特點在腫瘤發(fā)生及進展中起著重要的作用，故其近

2、年來已成為腫瘤研究領域的熱點之一。目前為止，MiRNAs已被證實與多種腫瘤相關。MiRNAs在腫瘤中主要通過調節(jié)不同的通路及其他基因而起到抑癌或促癌作用，它可以作用在細胞調節(jié)的各個環(huán)節(jié)，包括細胞循環(huán)、細胞凋亡、細胞的遷移與侵犯等。
　　乳腺癌一直是嚴重威脅女性生命健康的全球性問題，近年來乳腺癌在外科手術及輔助治療方面的進展已達到一定的局限，故怎樣尋求更有效的輔助治療手段提高乳腺癌預后一直是乳腺癌治療領域中的熱點問題。而miRNAs

3、的出現(xiàn)為乳腺癌指明了一條新的研究方向。目前為止，已有多種miRNAs被證實與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、預后及耐藥相關。而MiR-212雖被發(fā)現(xiàn)與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及侵襲性相關，如非小細胞性肺癌細、胰腺導管腺癌、胃癌等，但卻鮮有其與乳腺癌的可能關聯(lián)及作用機制的研究。
　　故本研究首先通過基于SYBR GreenⅠ染料熒光分析的Realtime RT-PCR技術檢測乳腺浸潤性導管癌中的miR-212的表達，并分析其與乳腺癌常見的臨床病理特

4、征的關系。然后通過轉染miR-212 inhibitor至乳腺癌MCF-7細胞株中檢測其對乳腺癌細胞增殖活力及侵襲性的影響。探討miR-212在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中可能的作用及其臨床意義。
　　目的:
　　探索miR-212在浸潤性乳腺導管癌組織中的表達情況，并分析其與各臨床病理特點之間的相關性及對乳腺癌細胞的影響。
　　方法:
　　采用莖環(huán)Realtime RT-PCR技術檢測37例配對浸潤性乳腺癌癌組織及癌旁正常

5、乳腺組織組織中miR-212的表達情況，統(tǒng)計分析其表達水平并將之與乳腺癌常見臨床病理指標做比較。設計并合成miR-212 inhibitor，分別以20、40、80nM濃度通過LipofectamineTM2000轉染乳腺癌MCF-7細胞株，同樣采用Realtime RT-PCR技術檢測轉染前后MCF-7細胞株中miR-212表達情況。利用CCK-8法分析轉染miR-212 inhibitor后細胞活力，通過Transwell實驗檢測細

6、胞的侵襲能力。
　　結果:
　　1.根據擴增曲線及溶解曲線結果發(fā)現(xiàn)利用Realtime RT-PCR檢測技術可特異性檢測miR-212的表達。
　　2.miR-212在浸潤性乳腺癌組織中的相對表達量明顯高于癌旁配對的正常乳腺組織，兩者的差異具有顯著性(P＜0.001)。
　　3.miR-212表達水平在乳腺癌患者合并淋巴結轉移中明顯高于其對應淋巴結轉移陰性患者(3.375 vs.1.452， P=0.003)。并

7、且較高TNM分期及較高增殖指數(ki67)的乳腺癌患者也具有較高的miR-212表達水平(Ⅲ期=4.422 vs.Ⅱ期=2.633 vs.Ⅰ期=1.452;P=0.015)，(3.260 vs.1.394，P=0.013)。未發(fā)現(xiàn)乳腺癌中miR-212表達水平與月經狀況、腫塊大小、雌激素和孕激素受體狀態(tài)、Her-2等其他病理指標相關(P＞0.05)。
　　4.不同濃度miR-212 inhibitor轉染后的MCF-7細胞株中表達

8、miR-212較陰性對照組及空白組均明顯減少(P＜0.001)。
　　5.CCK-8實驗發(fā)現(xiàn)不同濃度miR-212 inhibitor的轉染組較對照組及空白組細胞增殖活力均明顯下降，存在統(tǒng)計學差異(P＜0.001)，提示miR-212表達下調導致細胞活力下降。
　　6.Transwell實驗發(fā)現(xiàn)不同濃度miR-212 inhibitor的轉染組透膜細胞明顯少于陰性對照組及空白組(P＜0.001)，提示抑制miR-212表達可