抗乙肝病毒新藥ZBH201001的一般毒性研究.pdf

1、目的:ZBH201001是軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所研究人員在阿米福韋化學(xué)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)合成的一種核苷類抗乙肝病毒藥物。本研究依據(jù)藥物臨床前安全性評(píng)價(jià)相關(guān)指導(dǎo)原則，以Beagle犬為研究對(duì)象，分別進(jìn)行單次給藥毒性研究和重復(fù)給藥毒性研究，觀察動(dòng)物出現(xiàn)的毒性反應(yīng)，了解ZBH201001的急性毒性作用，以及重復(fù)給藥毒性作用的靶器官及其損害的可逆性，確定未觀察到損害作用的劑量(NOAEL)，為其臨床試驗(yàn)的用藥劑量和用藥安全劑量范圍提供參考，

2、同時(shí)為該新藥臨床申請(qǐng)和新藥注冊(cè)申請(qǐng)?zhí)峁?shù)據(jù)支持。
　　方法:(1) Beagle犬經(jīng)口急性毒性試驗(yàn):采用近似致死劑量法，單次經(jīng)口灌胃給藥，給藥劑量分別為118、264、594、890、1334、2000mg/kg體重。毒性檢測(cè)指標(biāo)包括一般臨床觀察、體重、攝食量、體溫、心電圖、血液學(xué)、血液生化、凝血指標(biāo)以及尿液化學(xué)，給藥觀察3周后，對(duì)所有動(dòng)物進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。
　　(2) Beagle犬經(jīng)口重復(fù)給藥1個(gè)月毒性試驗(yàn):實(shí)驗(yàn)設(shè)6.

3、0、12.0、24.0mg/kg體重組及玉米油溶劑對(duì)照組，每天經(jīng)口給藥1次，給藥期30天，給藥結(jié)束后恢復(fù)4周。連續(xù)給藥9天后，因各劑量組動(dòng)物均出現(xiàn)了明顯的毒性反應(yīng)，故將劑量調(diào)低為3.0、6.0與9.0 mg/kg體重，繼續(xù)給藥至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。實(shí)驗(yàn)期間每日進(jìn)行一般臨床觀察與體重、攝食量測(cè)定，給藥中期、給藥結(jié)束與恢復(fù)期分別進(jìn)行體溫、心電圖、血液學(xué)、血液生化、凝血指標(biāo)與尿液化學(xué)檢測(cè)，并于給藥結(jié)束與恢復(fù)期結(jié)束進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。
　　結(jié)果:(

4、1) Beagle犬經(jīng)口急性毒性試驗(yàn):Beagle犬單次經(jīng)口灌胃給藥，594mg/kg體重及以上劑量組動(dòng)物給藥后籠旁觀察顯示，給藥后和/或藥后次日可見動(dòng)物嘔吐，偶見稀便。隨后觀察到動(dòng)物攝食狀況普遍較差、體重持續(xù)降低;約自第3周起，動(dòng)物攝食狀況逐漸好轉(zhuǎn)，體重逐漸增加。890mg/kg體重劑量組1只雌性動(dòng)物于給藥后第12天意外死亡，重復(fù)給予該劑量雄性動(dòng)物存活。118mg/kg及264mg/kg組給藥后觀察到動(dòng)物攝食減少，體重輕度降低。較高劑

5、量組動(dòng)物給藥后個(gè)別時(shí)間點(diǎn)個(gè)別血液學(xué)指標(biāo)、尿液化學(xué)指標(biāo)出現(xiàn)異常變化，體溫、心電圖等參數(shù)未見有毒理學(xué)意義的改變。組織病理學(xué)檢查:890mg/kg組意外死亡動(dòng)物尸檢除體型消瘦外未見明顯異常，鏡下檢查見肺嚴(yán)重水腫、出血、肺泡上皮脫落，胃腸系統(tǒng)出現(xiàn)病變;其余6只存活動(dòng)物剖殺，體表和內(nèi)臟檢查均未見異常。1334mg/kg體重組動(dòng)物肝臟灶性肝細(xì)胞空泡變性、散在壞死，結(jié)腸出血、上皮細(xì)胞壞死、炎性細(xì)胞浸潤(rùn);2000mg/kg體重組動(dòng)物胃黏膜壞死、水腫;其

6、他動(dòng)物各臟器未見明顯異常。
　　(2) Beagle犬經(jīng)口重復(fù)給藥1個(gè)月毒性試驗(yàn):結(jié)果顯示，以24.0、12.0、6.0 mg/kg體重劑量給藥9天后，雌、雄動(dòng)物均表現(xiàn)出胃腸毒性反應(yīng)，包括稀便、動(dòng)物攝食狀況差、體重降低等體征，并呈現(xiàn)較明顯的量效與時(shí)效關(guān)系。因此將劑量將低為9.0、6.0與3.0 mg/kg體重繼續(xù)給藥，我們觀察到高劑量9.0 mg/kg體重組動(dòng)物攝食量、體重持續(xù)降低，并陸續(xù)有稀便和/或血便等現(xiàn)象，并呈現(xiàn)消瘦、活動(dòng)減

7、少等臨床體征;3.0、6.0mg/kg組動(dòng)物體重雖仍低于同期對(duì)照組，但基本保持在穩(wěn)定的水平，未進(jìn)一步降低。無(wú)論劑量調(diào)整前還是調(diào)整后，高、中、低劑量組動(dòng)物的攝食量變化表現(xiàn)出與體重變化基本相一致的變化趨勢(shì)。各期高、中、低劑量組心電圖、體溫及眼科檢查均未見有毒理學(xué)意義的異常變化。給藥中期與給藥結(jié)束后血液學(xué)檢查提示高劑量組動(dòng)物APTT明顯降低，并且這種變化在恢復(fù)期恢復(fù)正常，提示受試藥物可能會(huì)影響動(dòng)物的內(nèi)源性凝血系統(tǒng)。各期尿液分析高、中、低劑量組

8、未見異常改變。組織病理學(xué)檢查，中劑量和/或高劑量組對(duì)消化管與胃腸系統(tǒng)具有明顯的毒性作用，中劑量和/或高劑量組動(dòng)物胸腺、睪丸、前列腺、胰腺萎縮，骨髓紅系造血抑制、脂肪化，肝細(xì)胞腫脹、變性。上述各組織/臟器病變?cè)诨謴?fù)期均減輕和/或恢復(fù)，說(shuō)明其毒性具有一定的可恢復(fù)性。給藥結(jié)束高、中、低劑量組均有部分動(dòng)物出現(xiàn)肺水腫、肺泡上皮脫落、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等病變，恢復(fù)期結(jié)束各組動(dòng)物未見上述病變;考慮到口服給予供試品混懸液時(shí)動(dòng)物偶有嗆咳反應(yīng)，并且肺部病變的嚴(yán)重

9、程度及發(fā)生率無(wú)量效關(guān)系，因此認(rèn)為所觀察到的肺部病變與給藥操作有關(guān)。
　　結(jié)論:在本試驗(yàn)條件下，(1)Beagle犬經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)MTD＞2000mg/kg體重，最小毒性反應(yīng)劑量為118mg/kg體重，胃腸道可能是ZBH201001對(duì)Beagle犬急性毒性作用的靶器官/靶組織。(2)Beagle犬經(jīng)口重復(fù)給藥1個(gè)月毒性試驗(yàn)，中劑量和/或高劑量可引起食管、肝臟、胸腺、睪丸、前列腺、胰腺、骨髓、腎臟、胃腸系統(tǒng)一定的毒性反應(yīng)，并可能影響