一種半胱氨酸改造的MLIF類似物對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用的研究蘭州地區(qū)健康成人脈沖振蕩肺功能正常值的分析研究.pdf

1、本文對一種半胱氨酸改造的MLIF類似物對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用及蘭州地區(qū)健康成人脈沖振蕩肺功能正常值的分析進行了研究。本研究分為兩個部分：
　　第一部分：缺血性腦血管?。╥schemic cerebrovascular disease。ICVD）是目前在臨床上常見的一種神經系統疾病。ICVD發(fā)生時，缺血再灌注引起的繼發(fā)性損傷的關鍵環(huán)節(jié)是急性炎癥反應。此時細胞因子被大量的釋放、粘附分子的表達明顯升高，白細胞及其它免疫細胞被激

2、活，從而釋放各種炎性介質如細胞因子包括TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、趨化因子及粘附分子等，TNF-α被認為是炎癥網絡中的關鍵因子，是全身炎癥反應的始動介質，同時，缺血再灌注時脂質過氧化反應明顯加速，自由基的平衡被打破，其產生過量而清除減少，這些因素都嚴重損傷了神經細胞。因此，減輕炎癥反應、減少自由基就對保護缺血再灌注后的神經功能具有重要意義。單核細胞移動抑制因子（monocyte locomotion inhibitory

3、 factor，MLIF）是一種抗炎性反應的多肽，它能抑制人單核細胞、多形核白細胞的移動，抑制炎癥反應的發(fā)生、逃避宿主免疫，同時它還對細胞因子TNF-α、IL-1β等的分泌以及相應受體的表達有明顯的抑制作用，從而影響炎癥反應的整個過程。研究表明MLIF的抗炎活性基團是Cys-Asn-Ser。本實驗試圖通過對MLIF的活性基團Cys-Asn-Ser的N端進行修飾，了解新的修飾后的MLIF類似物對大鼠腦缺血再灌注后神經功能改變及TNF-α、

4、IL-1β表達的影響，來研究這種新的MLIF類似物可能的藥理作用機制，從而為臨床水平的研究提供理論依據，以便將來更好地造福缺血性腦病的患者。
　　目的：對抗炎肽MLIF的活性肽段Cys-Asn-Ser的N端進行了全新設計和化學結構改造。為了提高Cys-Asn-Ser的抗氧化活性，我們在Cys-Asn-Ser的N端連接一個極性不帶電荷的半胱氨酸。采用固相合成法合成一條全新設計的MLIF類似物Cys-Cys-Asn-Ser以及MLIF

5、活性基團小分子肽段 Cys-Asn-Ser；建立大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型，以 MLIF活性基團小分子肽段Cys-Asn-Ser作為對照，考察這個新的MLIF類似物對大鼠缺血性腦病是否具有治療作用，并初步探討這種作用可能的發(fā)生機制。
　　方法：⑴采用固相合成法，合成一個新的半胱氨酸改造的MLIF類似物Cys-Cys-Asn-Ser和MLIF的活性基團小分子肽段Cys-Asn-Ser，然后對合成的粗肽進行脫鹽處理選用的是Seph

6、adex G10凝膠柱，并結合制備型HPLC純化粗肽，最后采用MS對純化產物進行鑒定。⑵用線栓來阻塞大腦中動脈，從而構建SD大鼠腦缺血再灌注損傷的模型，待造模成功、缺血再灌注24h的時候，采用Longa法對大鼠神經功能缺損進行評分；大鼠腦切片進行 TTC染色，觀察腦缺血再灌注后腦梗死體積的變化，探討這個新的半胱氨酸改造的MLIF類似物Cys-Cys-Asn-Ser對缺血性腦病的治療作用。⑶在大鼠腦缺血再灌注24h后，取大鼠腦組織勻漿測定

7、TNF-α和IL-1β的含量，觀察這個新改造的MLIF類似物Cys-Cys-Asn-Ser的抗炎活性。
　　結果：①采用固相合成法獲取的新的由半胱氨酸改造的MLIF類似物Cys-Cys-Asn-Ser和MLIF的活性基團小分子肽段Cys-Asn-Ser，前者的產率是40.5％，后者的產率是61.2%，HPLC分離純化后，證明二者的純度均達到95%以上，且經質譜對產物的鑒定，結構完全相符。②實驗的結果表明，模型組大鼠均出現了嚴重的神

8、經功能受損的癥狀，神經功能評分的結果為(2.20±0.45)；大鼠缺血側的腦組織有非常明顯的梗死灶，測得梗死體積為(152.85±28.83)mm3；而與模型組大鼠不同的是，各藥物治療組均在不同程度上改善了MCAO大鼠的病理改變，包括減小腦梗死的體積和降低神經功能評分。與活性基團小分子肽段Cys-Asn-Ser相比，新的MLIF類似物Cys-Cys-Asn-Ser的活性有所提高。③從TNF-α和IL-1β的檢測數據來看，用一個半胱氨酸對

9、MLIF活性基團小分子肽段Cys-Asn-Ser修飾后，新的MLIF類似物Cys-Cys-Asn-Ser的抗炎活性有所增強。由此可見，新的MLIF類似物Cys-Cys-Asn-Ser有抑制炎癥反應的作用，同時它自身又有著抗氧化的作用，這兩方面的原因使得它對于缺血性腦損傷有保護作用。
　　結論：一種新的MLIF類似物Cys-Cys-Asn-Ser對缺血性再灌注腦損傷有一定的神經保護作用，同時其修飾后的抗炎活性比MLIF活性基團小分子

10、肽段Cys-Asn-Ser有所增強。
　　第二部分：呼吸系統疾病是嚴重危害人民健康的常見病、多發(fā)病，已經構成影響公共健康的重大問題。其不僅發(fā)病率高，許多疾病起病隱襲，肺功能損害嚴重，致殘率高，給社會和國民經濟造成了巨大損失。因此，呼吸系統疾病的早診斷、早治療、早預防就顯得尤為重要。在呼吸系統疾病的檢查方法中，呼吸功能的測定已經越來越受到人們的重視，但肺功能檢查常規(guī)項目的信號源均是受試者自己的呼吸，檢查結果可靠與否與受試者自己的理解

11、能力和配合能力密切相關，對于一些特殊人群如年老、體弱、幼兒等患者，就不能進行這樣的檢查，而脈沖振蕩法（impulse oscillometry，IOS）測定技術的突出優(yōu)點是受試者僅需平靜呼吸，操作簡便、適用對象廣泛，目前在臨床上越來越受到青睞。影響肺功能檢查的正常值的因素非常多，主要與受試者的種族、年齡、性別、體重、身高等因素密切相關，其次還與受試者的生存環(huán)境、工種、體力活動及吸煙與否等因素也有關。因此，臨床上選取合適的預計值，才是提高

12、診斷準確率的關鍵。中國目前仍然沒有統一的脈沖振蕩法（IOS）測定的各參數的參考預計值及正常值公式，現在臨床沿用的還是歐美國家（主要是歐洲）提供的正常值范圍，這些預計值不一定符合中國人的實際，而且國內各地區(qū)在應用IOS法做肺功能測定時的標準亦不一致，這樣就不利于對疾病做出準確診斷。
　　目的：建立我國自己的IOS肺功能預計值公式，制定出蘭州地區(qū)IOS正常值及預計值公式。為蘭州地區(qū)乃至西北五省的臨床醫(yī)生尤其是呼吸科醫(yī)生提供參考，也將為

13、國內其他地區(qū)的臨床醫(yī)生提供一個線索，為爭取早日建立我國自己的、統一的預計值公式及正常值標準奠定基礎。
　　方法：研究對象共計920例，其中女470例，男450例。選擇對象是：2008年2月至2011年12月在蘭州大學第二醫(yī)院進行體檢的18歲及以上的健康成人；外科非心肺和非氣道疾病擇期手術的術前檢查者。研究方法歐洲呼吸學會（ERS）推薦的IOS測量標準是本研究所采用的檢查方法。檢查前至少24 h內未用過膽堿能受體拮抗劑、抗過敏類藥物

14、、茶堿類藥物、β2受體激動劑、腎上腺素能受體抑制劑及激素類藥物等。測定的指標包括：IOS參數、結構參數圖、頻譜分析圖、阻抗容積圖（Z-V圖）等。其中實驗測定的IOS的主要參數為：呼吸總阻抗（Zrs）、中心氣道阻力（R20）、總氣道阻力（R5）、中心阻力（Rc）、周邊阻力（Rp）、周邊粘性阻力（R5-R20）、共振頻率（Fres）及周邊彈性阻力（X5）。統計學分析使用SPSS17.0軟件進行數據分析。
　　結果：⑴對蘭州地區(qū)920例

15、18歲及以上健康成人嚴格按照歐洲呼吸學會（RES）推薦的IOS測量標準進行IOS測定，IOS參數Zrs、Fres、R5、R20、X5、Rc、Rp均不呈正態(tài)分布。⑵各參數正常參考值范圍與目前臨床上一直在采用的國外提供的正常參考值范圍，二者的配對t檢驗（P＜0.001）有顯著性差異。⑶在蘭州地區(qū)，分別建立了當地成人健康男性和健康女性 IOS主要參數（Zrs、Fres、R5、R20、X5、）的正常參考值預計公式。⑷共振頻率（Fres）均值及9

16、5%可信區(qū)間均大于目前國內外采用的10Hz正常值，甚至大于15Hz，男女相比無顯著性差異。⑸根據建立的蘭州地區(qū)健康成人的IOS各參數的正常參考值預計公式，表明粘性阻力（R）主要與體重、身高相關，與體重呈正相關，而身高的影響最大，呈負相關。⑹在本研究所涉及的年齡范圍內（18歲～80歲），IOS各參數值（除外X5）隨著年齡的增長無明顯變化，而X5與年齡成負相關。
　　結論：蘭州地區(qū)健康成人脈沖振蕩（IOS）肺功能各參數的正常參考值范圍