殼聚糖-BMP-2質(zhì)粒溫敏水凝膠復(fù)合體的生物相容性及促犬牙槽骨再生的研究.pdf

1、目的：本項(xiàng)目擬制備殼聚糖-甘油磷酸溫敏水凝膠（CS/α,β-GP）及負(fù)載含有骨形態(tài)蛋白2質(zhì)粒DNA（pDNA-BMP2）的殼聚糖納米粒CSn(pDNA-BMP2)，二者復(fù)合，構(gòu)建CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP復(fù)合修復(fù)體系。研究該體系的組織相容性，以及該體系在比格犬牙槽骨再生中的作用。
　　方法：
　　一、包載pDNA-BMP2的復(fù)合修復(fù)體系CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP及不包載pDNA-BMP2的納米溫敏

2、水凝膠復(fù)合支架（CS/CSn-GP）的制備及性質(zhì)檢測(cè)：采用離子交聯(lián)法制備CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP及CS/CSn-GP復(fù)合修復(fù)體系；采用掃描電鏡觀察其形態(tài)；試管倒置法測(cè)定其溫敏性。
　　二、CS/CSn-GP復(fù)合修復(fù)體系組織相容性的測(cè)定：將1ml CS/CSn-GP復(fù)合修復(fù)體系注入18只SD大鼠左、右后肢大腿肌袋內(nèi)，于3天及1、2、4、6、9周分批處死，取注射部位組織，進(jìn)行HE染色，并觀察其炎癥反應(yīng)。
　　三、

3、CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP和CS/CSn-GP復(fù)合修復(fù)體系在非炎癥性骨缺損中的修復(fù)作用測(cè)定：SD大鼠顱骨左右兩側(cè)，各做5mm圓形缺損，隨機(jī)分為兩組：
　　CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP組（包載質(zhì)粒組）和CS/CSn-GP組（無質(zhì)粒組）。兩組大鼠均于顱骨左側(cè)分別注入CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP或CS/CSn-GP復(fù)合體系，右側(cè)不置入任何材料做空白對(duì)照。于第4周和第8周，兩組分批處死等量SD大鼠，實(shí)

4、驗(yàn)部位顱骨HE染色，觀察其成骨差異性。
　　四、CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP和CS/CSn-GP復(fù)合修復(fù)體系在炎癥性骨缺損中的修復(fù)作用測(cè)定：比格犬第2、3前磨牙，建立牙周炎模型，將32顆實(shí)驗(yàn)牙齒隨機(jī)分為三組：①CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP組（包載質(zhì)粒組）；②CS/CSn-GP組（無質(zhì)粒組）；③空白組。每組注入相應(yīng)材料，8周后處死。
　　（1）Masson三染色觀察牙周炎部位牙槽骨再生的情況；
　

5、?。?）鈣鈷法染色觀察骨缺損部位堿性磷酸酶（ALP）表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　一：CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP和CS/CSn-GP復(fù)合修復(fù)體系的制備及性質(zhì)檢測(cè)：
　　（1）掃描電鏡顯示復(fù)合體系為多孔的交聯(lián)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)且CSn（pDNA-BMP2）能均勻分散于水凝膠支架的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中；
　?。?）試管倒置法顯示：復(fù)合體系均可在37℃下3min內(nèi)由可流動(dòng)的溶膠狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)椴豢闪鲃?dòng)的凝膠狀態(tài)。
　　二：

6、CS/CSn-GP復(fù)合修復(fù)體系組織相容性的測(cè)定：HE切片顯示，復(fù)合體注入肌袋后，未見明顯炎癥反應(yīng)。
　　三、CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP和CS/CSn-GP復(fù)合修復(fù)體系在非炎癥性骨缺損中的修復(fù)作用測(cè)定：HE染色顯示，兩組相對(duì)于空白對(duì)照，均有不同程度的新骨修復(fù)，包載質(zhì)粒組較無質(zhì)粒組新骨生成量多且成熟度高。
　　四、CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP和CS/CSn-GP復(fù)合修復(fù)體系在牙周炎癥性骨缺損中的修復(fù)作用

7、測(cè)定：
　?。?）Masson三染色顯示包載質(zhì)粒組與無質(zhì)粒組，均有不同程度的牙槽骨再生，包載質(zhì)粒組再生顯著；
　?。?）鈣鈷法顯示包載質(zhì)粒組ALP強(qiáng)陽性，無質(zhì)粒組ALP弱陽性，空白對(duì)照組為陰性。
　　結(jié)論：
　　一：CS/CSn-GP復(fù)合修復(fù)體系具有良好的組織相容性及溫敏性，是一種良好的組織工程支架。
　　二：CS/CSn-GP復(fù)合修復(fù)體系有利于牙槽骨再生，包載pDNA-BMP2后促牙槽骨再生作用更為顯著。