魚類脂味覺的行為學檢測及候選脂味受體CD36的克隆與表達.pdf

1、味覺是動物對目標食物采取接受或拒絕行為而進行化學感受的最后一步,對于動物攝取食物的安全及動物合理的營養(yǎng)需要十分重要。傳統(tǒng)上認為,哺乳動物具有5種基本味覺,即:酸、甜、苦、咸和鮮(umami)。研究表明,人們之所以能夠感受酸、甜、苦、咸、鮮味,是因為在味蕾中存在著這五種味覺受體(tastereceptor,TR)。近年來對嚙齒動物和人類的研究表明可能還存在第六種味覺,即對脂肪酸等脂肪類食物的味覺感受(脂味覺)。研究顯示,斑馬魚具有苦味和氨

2、基酸味的感受,但魚類是否具有脂味感受呢?到目前為止,這還是一個謎?；诖?本論文擬通過行為學實驗檢測魚類是否具有對脂肪酸的味覺感受,如果存在,我們擬進一步嘗試對魚類候選脂味受體進行鑒定。
　　 由于魚類生活在水中,給有關(guān)魚類味覺行為學的實驗帶來不小的難度。我們選取斑馬魚和藍鯊為代表,進行了一系列的行為學實驗來探索魚類的味覺。對于斑馬魚,我們分別制做了含亞麻酸和亞油酸、氨基酸和苦味劑denatonium benzoat等不同促味劑

3、的餌料,并用熒光染料DiIC12(3)對它們進行了熒光標記,然后分別飼喂斑馬魚,通過錄像觀察它們對不同食物的吞吐情況,食后迅速解剖腸道在熒光顯微鏡下觀察腸道中食物的熒光強度,分析魚類對不同食物的偏愛性。結(jié)果表明:在斑馬魚攝食的初級階段,觀察到喂養(yǎng)含苦味劑餌料的斑馬魚有明顯的吞食后再吐出現(xiàn)象,而喂養(yǎng)亞麻酸和亞油酸或氨基酸餌料的斑馬魚吞食餌料后都沒有再吐出現(xiàn)象；我們進一步觀察斑馬魚腸道中食物的熒光強度,發(fā)現(xiàn)斑馬魚對不同餌料的喜好性為:脂肪酸

4、>氨基酸>苦味劑。綜合之,可以認為斑馬魚對含脂肪酸和氨基酸的食物具有偏好性,似乎還更偏好含脂肪酸的餌料,而對含苦味劑denatonium benzoate的餌料有明顯的厭惡感。類似地,對于藍鯊,我們分別制做了含亞麻酸和亞油酸、糖、氨基酸和苦味劑denatonium benzoat等不同促味劑的餌料,然后分別飼喂藍鯊,觀察它們對不同食物的吞吐情況,觀察養(yǎng)殖容器中剩余的餌料的多少,計算吃掉餌料占飼喂餌料的百分比,分析它對不同食物的偏愛性。藍

5、鯊的味覺行為學試驗表明:藍鯊對含甜味劑糖精的餌料非常喜歡,有明顯的偏愛,對含脂肪酸和氨基酸的餌料次之,有一定的偏愛,但對含苦味劑denatonium benzoat的餌料不喜歡,甚至厭惡。魚類中的這些行為學實驗證明:魚類除了具有苦味和氨基酸味的感受外,還具有脂肪酸的味覺感受。另外,我們的實驗還發(fā)現(xiàn)藍鯊對甜味具有偏好性,說明魚類可能具有甜味的味覺感受,這與斑馬魚無甜味覺感受能力的報道不一致。
　　 CD36是一種在大鼠和小鼠舌上皮

6、細胞的味蕾中均有表達的脂類黏合蛋白,最近的研究中被確定為感受脂肪酸的受體,尤其是用于識別長鏈脂肪酸。我們通過生物信息學分析發(fā)現(xiàn),斑馬魚中也存在CD36同源基因。通過RT-PCR和實時熒光定量PCR分別確定了CD36在不同成魚組織和不同胚胎發(fā)育時期中的表達。研究表明:CD36在不同成魚組織中的中的表達如下:在腸中的表達量最高,在肝、鰓、脾中表達量次之,而在脊椎、腎、腦、鰾中表達量相對較低。CD36在胚胎發(fā)育早期表達較高,在囊胚期的表達量達