新型自組裝短肽對(duì)皮膚創(chuàng)傷速度修復(fù)過(guò)程研究.pdf

1、目的：采用新型自組裝短肽R2I4R2和K2I4K2應(yīng)用于細(xì)胞三維培養(yǎng)和皮膚創(chuàng)傷快速修復(fù)，并初步探索其作用機(jī)制。
　　方法：剛果紅染色和原子力顯微鏡(AFM)檢測(cè)短肽R2I4R2和K2I4K2的宏觀結(jié)構(gòu)；圓二色光譜(CD)檢測(cè)理化條件對(duì)短肽R2I4R2和K2I4K2二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響；紅細(xì)胞裂解試驗(yàn)檢測(cè)兩條短肽對(duì)細(xì)胞膜的裂解作用；CCK-8和AO/EB染色檢測(cè)短肽R2I4R2和K2I4K2對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞HFF-1在三維環(huán)境中增殖情況

2、；流式細(xì)胞周期分析HFF-1細(xì)胞在短肽形成的三維體系中的周期變化；建立SD大鼠皮膚創(chuàng)傷修復(fù)模型，考察兩條短肽對(duì)皮膚創(chuàng)傷修復(fù)的影響；HE染色和免疫組化檢測(cè)短肽R2I4R2和K2I4K2對(duì)皮膚創(chuàng)傷修復(fù)過(guò)程的病理變化；Real-time PCR檢測(cè)皮膚修復(fù)相關(guān)蛋白基因和通路相關(guān)基因表達(dá)量的變化；以Taq DNA聚合酶作蛋白穩(wěn)定假設(shè)模型，通過(guò)紫外可見(jiàn)光譜和 real-time PCR考察短肽R2I4R2和K2I4K2對(duì)蛋白分子的保護(hù)作用。

3、>　　結(jié)果：CD檢測(cè)顯示兩條短肽都具有介于α-螺旋和無(wú)規(guī)卷曲之間的二級(jí)結(jié)構(gòu)，且在不同的離子和溫度條件下都能保持較為穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。剛果紅染色和(AFM)結(jié)果表明兩條短肽都能自組裝形成納米纖維支架，進(jìn)而形成水凝膠。而紅細(xì)胞裂解試驗(yàn)和CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示兩條短肽均無(wú)細(xì)胞毒性，能夠很好的應(yīng)用于細(xì)胞三維培養(yǎng)和創(chuàng)傷修復(fù)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明短肽R2I4R2使創(chuàng)傷修復(fù)速度提高約28％，而K2I4K2提高約34%。而HE染色結(jié)果顯示皮膚傷口加入短肽后3-5 d

4、炎癥細(xì)胞減少，7 d有血管形成，15 d后肉芽組織纖維化，進(jìn)入組織重塑期。免疫組化結(jié)果進(jìn)一步明確在加入短肽R2I4R2和K2I4K2后，5 d時(shí)血管內(nèi)皮細(xì)胞因子CD34減少，7 d時(shí)VEGF含量增多。Real-time PCR結(jié)果顯示HFF-1細(xì)胞在短肽形成的三維體系中， PEGRF基因表達(dá)量降低， VEGF、Integrin-α3、Integrin-α5和β-tublin基因表達(dá)量都有明顯升高。UV檢測(cè)結(jié)果顯示，短肽R2I4R2和K2

5、I4K2使對(duì)假設(shè)模型分子Taq酶在高溫下的半衰期提高了1.44和1.68倍。Real-time PCR結(jié)果表明短肽R2I4R2和K2I4K2使 Taq酶的擴(kuò)增效率提高了約1.75和1.86倍。
　　結(jié)論：本研究采用的新型自組裝短肽R2I4R2和K2I4K2二級(jí)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，都能應(yīng)用于細(xì)胞的三維培養(yǎng)。且兩條短肽都能刺激創(chuàng)傷處血管再生、促進(jìn)成纖維細(xì)胞遷移而使皮膚創(chuàng)傷快速修復(fù)的作用。本研究將激發(fā)更多的短肽設(shè)計(jì)理念的開(kāi)發(fā)和短肽在組織修復(fù)再生、