高強(qiáng)度聚焦超聲誘導(dǎo)阿苯達(dá)唑熱敏脂質(zhì)體殺傷細(xì)粒棘球蚴的研究.pdf

1、目的:
　　探索高強(qiáng)度聚焦超聲（High intensity focused ultrasound,HIFU）誘導(dǎo)阿苯達(dá)唑熱敏脂質(zhì)體（Thermosensitive liposomes loaded with albendazole,TSL-ABZ）殺傷包蟲原頭蚴的效果。利用HIFU的熱效應(yīng)來誘導(dǎo)熱敏脂質(zhì)體靶向釋藥，從而提高阿苯達(dá)唑的生物利用度，增強(qiáng)對(duì)包蟲病的治療效果。
　　方法:
　　1.采用單因素實(shí)驗(yàn)，來確定阿苯達(dá)

2、唑熱敏脂質(zhì)體的制備方法。通過考察有機(jī)溶劑種類及用量、合成磷脂間的比例、水合介質(zhì)pH值、脂類與藥物比例、水浴溫度等因素，初步確定制劑處方和工藝條件。
　　2.通過透射電鏡、Nano ZS90Zetasizer粒徑測量、傅里葉近紅外光譜分析、熱重分析、體外釋放濃度測試等手段對(duì)該藥物載體進(jìn)行表征考察，以證明是否成功制備阿苯達(dá)唑熱敏脂質(zhì)體。
　　3．觀察阿苯達(dá)唑熱敏脂質(zhì)體對(duì)離體原頭蚴的影響。在不同水浴溫度下，將不同比例的阿苯達(dá)唑熱敏

3、脂質(zhì)體加入含有原頭蚴的囊液中，測定藥物濃度及在制劑作用影響下原頭蚴的活力。
　　4.觀察HIFU誘導(dǎo)阿苯達(dá)唑熱敏脂質(zhì)體對(duì)離體原頭蚴的殺傷效果。在一定高強(qiáng)度超聲劑量下，將不同比例的制劑藥物加入原頭蚴懸液中，在光鏡下觀察形態(tài)改變并計(jì)數(shù)其死亡率，HE染色、透射電鏡觀察原頭蚴組織病理結(jié)構(gòu)的變化，TUNEL熒光染色觀察原頭蚴核凋亡情況。
　　結(jié)果:
　　1.實(shí)驗(yàn)篩選出最佳的制備處方為：在藥脂比為1:40，DPPC:MPPC:DS

4、PG:ABZ成分比為66：7：5：3，緩沖液pH值為5.3，超聲時(shí)間為15min，水浴溫度為38℃條件下，熱敏脂質(zhì)體的平均包封率為78.7％，ABZ載藥率為1.91%。
　　2.透射電鏡下空白熱敏脂質(zhì)體為環(huán)形空心結(jié)構(gòu)，而阿苯達(dá)唑熱敏脂質(zhì)體呈黑色圓球狀；粒徑分析儀測定制備的 TSL-ABZ的平均粒徑為316nm，PDI為0.533，Zeta電位為-9.84mV；紅外光譜測試表明藥物與載體間未發(fā)生化學(xué)作用力，且藥物ABZ的結(jié)構(gòu)也未發(fā)生

5、改變，并證明藥物被包含在脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)中；DSC曲線證實(shí)制備的脂質(zhì)體具有熱敏特性，其相變溫度約為42.1℃。
　　3.在水浴時(shí)間24h，水浴溫度為42℃時(shí)，TSL-ABZ1000μl組能最大程度誘導(dǎo)原頭蚴死亡，死亡率較其他組更高。
　　4.經(jīng)過溫度測試后，選擇達(dá)到相變溫度的最適HIFU輻照劑量（75W12s），各實(shí)驗(yàn)組原頭蚴的死亡率呈現(xiàn)一定的增長趨勢(shì)，尤以HIFU+TSL-ABZ1000μl組為最高，形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)皮層破壞嚴(yán)重，

6、鈣顆粒消失，空泡化嚴(yán)重，頭鉤脫落，部分結(jié)構(gòu)甚至消失。熒光染色可見大量凋亡的細(xì)胞核。
　　結(jié)論:
　　1.通過本實(shí)驗(yàn)方法制備的熱敏脂質(zhì)體成功包裹了阿苯達(dá)唑標(biāo)準(zhǔn)品，脂質(zhì)體的形貌規(guī)則且呈單分散狀態(tài)。粒徑也已達(dá)到納米級(jí)，分散均一，制劑體系比較穩(wěn)定。
　　2.熱敏性磷脂可以控制藥物釋放，可依據(jù)實(shí)驗(yàn)條件選擇性的作用于實(shí)驗(yàn)對(duì)象。在室溫和體溫時(shí)，脂質(zhì)體內(nèi)的藥物不釋放，當(dāng)溫度超過相變輔料的熔點(diǎn)時(shí)，藥物釋放具有爆炸式的特點(diǎn)。
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