NR2A轉(zhuǎn)基因小鼠杏仁核區(qū)突觸可塑性及情緒記憶的研究.pdf

1、NMDA(N-methyl-D-aspartic acid)受體在學(xué)習(xí)記憶過程中發(fā)揮著重要作用，其中NR2亞基的不同組成是影響NMDA受體功能的決定因素。目前研究認(rèn)為，NR2B基因表達(dá)上調(diào)，NR2A/NR2B比例降低，使NMDA通道的開放時(shí)間延長，NMDA受體介導(dǎo)的LTP增強(qiáng)，并且行為學(xué)實(shí)驗(yàn)證明NR2B轉(zhuǎn)基因鼠學(xué)習(xí)記憶能力也有顯著提高。而對于NR2A基因表達(dá)上調(diào)，NR2A/NR2B比例升高，對LTP與學(xué)習(xí)記憶產(chǎn)生什么影響，目前還鮮有報(bào)道

2、。 本論文中利用NR2A轉(zhuǎn)基因模式小鼠，通過分子生物學(xué)，離體腦片電生理學(xué)和整體行為學(xué)技術(shù)，重點(diǎn)研究了NR2A亞基在小鼠杏仁核區(qū)的過量表達(dá)，對杏仁核區(qū)LTP(Long-term potentiation) 、LTD(Long-term depression)及杏仁核相關(guān)的學(xué)習(xí)記憶功能的影響，分析了NR2A亞基在杏仁核突觸可塑性和學(xué)習(xí)記憶中的作用機(jī)制。結(jié)果表明NR2A轉(zhuǎn)基因模式小鼠LTP下降，杏仁核相關(guān)學(xué)習(xí)記憶能力減弱。提示我們N

3、R2A亞基在前腦的過量表達(dá)，NR2A/NR2B比例的升高，將減弱杏仁核區(qū)LA/BLA通路的LTP，損害情緒相關(guān)的學(xué)習(xí)記憶。 1.NR2A轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定及外源基因表達(dá)分析采用SV40引物，提取鼠尾DNA進(jìn)行基本基因型檢測為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供可靠鼠源。同時(shí)根據(jù)NR2A基因全序列設(shè)計(jì)特異引物，采用RT-PCR的方法來確定NR2A基因在小鼠大腦的表達(dá)。RT-PCR分析表明NR2A基因在轉(zhuǎn)基因小鼠的皮層和杏仁核腦區(qū)均過量表達(dá)。 2

4、．NR2A轉(zhuǎn)基因小鼠杏仁核突觸可塑性的研究采用腦片場電位記錄技術(shù)分別對杏仁核區(qū)的基本突觸傳遞及突觸可塑性(LTP、LTD)進(jìn)行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：NR2A轉(zhuǎn)基因小鼠與同窩對照鼠相比LTP明顯減弱，但基本突觸傳遞及LTD沒有明顯變化。同時(shí)結(jié)合NMDA受體拮抗劑和NR2A亞基拮抗劑的研究表明，NR2A亞基的確參與了杏仁核區(qū)LTP的形成，NR2A基因的上調(diào)和下調(diào)都將減弱杏仁核區(qū)NMDA依賴的LTP。 3．NR2A轉(zhuǎn)基因小鼠基本行為及情

5、緒的研究在進(jìn)行學(xué)習(xí)記憶相關(guān)行為學(xué)檢測前，我們利用開場、高架十字迷宮、強(qiáng)迫游泳及痛覺閾值等基本行為學(xué)方法，對NR2A模式鼠的基本行為及情緒表現(xiàn)進(jìn)行了檢測。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因小鼠與同窩對照鼠在基本活動量、探索性、情緒以及先天性恐懼等基本生理特性上無顯著性差異，從而可以排除轉(zhuǎn)基因鼠因基本生理特性的改變而影響其學(xué)習(xí)記憶能力的可能。 4．NR2A轉(zhuǎn)基因小鼠杏仁核相關(guān)學(xué)習(xí)記憶行為的研究選取與杏仁核相關(guān)的恐懼和獎(jiǎng)賞性的情緒性學(xué)習(xí)記憶任務(wù)——被