條斑紫菜遺傳多樣性及其遺傳圖譜的構(gòu)建.pdf

1、紫菜(Porphyra)屬紅藻門(Rhodophyta)紅毛菜科(Bangiacea)，廣泛分布于從寒帶到亞熱帶的潮間帶水域，是海藻栽培業(yè)的主要對(duì)象，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。近年來(lái)，隨著紫菜栽培業(yè)規(guī)模的逐年擴(kuò)大，人們對(duì)紫菜栽培的科技含量，尤其是對(duì)優(yōu)良品種的供應(yīng)和科學(xué)管養(yǎng)技術(shù)的開(kāi)發(fā)等方面要求越來(lái)越高。然而，由于多年來(lái)紫菜養(yǎng)殖基本基本從野生系獲取種菜，缺乏必要的品種選育，所以大量栽培的紫菜不僅對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力以及抗病害的能力有所下降，而且對(duì)周邊

2、地區(qū)的自然種造成了影響及污染。所以，應(yīng)該及時(shí)有效地利用分子生物學(xué)手段對(duì)我國(guó)沿海紫菜資源進(jìn)行遺傳多樣性調(diào)查，了解各個(gè)自然種及養(yǎng)殖種的遺傳特性并尋找其特異性標(biāo)記，以便品種選育及改良，種質(zhì)資源保護(hù)等工作方面順利展開(kāi)。
　　 條斑紫菜是一種很好的遺傳學(xué)和分子生物學(xué)研究對(duì)象。近年來(lái)，條斑紫菜相關(guān)研究進(jìn)展迅速，取得了一批創(chuàng)新性的成果。本研究首先以條斑紫菜葉狀體作為實(shí)驗(yàn)材料，對(duì)擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性(AFLP)反應(yīng)體系進(jìn)行了建立和優(yōu)化，建立適合于

3、紫菜葉狀體的AFLP反應(yīng)體系。通過(guò)對(duì)AFLP反應(yīng)體系常規(guī)流程中的實(shí)驗(yàn)材料選擇、基因組DNA的提取、酶切時(shí)間和預(yù)擴(kuò)稀釋倍數(shù)等步驟的優(yōu)化，初步建立了適合紫菜葉狀體的AFLP反應(yīng)體系。選用青島海水第一浴場(chǎng)和第二浴場(chǎng)的條斑紫菜作為實(shí)驗(yàn)對(duì)比。實(shí)驗(yàn)中DNA的提取采用改進(jìn)的CTAB方法，并利用液氮研磨、添加石英砂、增加裂解時(shí)間等方式進(jìn)行了優(yōu)化。酶切時(shí)間選用3、5、7小時(shí)作為對(duì)照，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳和分光光度法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)5小時(shí)時(shí)間的酶切效果最好，稀釋倍數(shù)選

4、用5倍、10倍、2倍0、30倍、40倍，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳、分光光度法和變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)發(fā)現(xiàn)稀釋40倍效果最好。連接反應(yīng)16℃連接過(guò)夜，預(yù)擴(kuò)選用E+A和M+C引物，選擴(kuò)選用B1、B2和B4引物，然后聚丙烯酰胺凝膠采用銀染方法進(jìn)行顯色。建立適宜AFLP方法對(duì)紫菜葉狀體基因組進(jìn)行分子標(biāo)記，將為紫菜分子生物學(xué)的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。
　　 為深入了解條斑紫菜之間的遺傳多樣性，本實(shí)驗(yàn)利用擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性技術(shù)(Amplifled

5、Fragment Length Polymorphism，AFLP)分析了13個(gè)條斑紫菜品系，在80對(duì)引物中，有11對(duì)能得到重復(fù)性好的多態(tài)性擴(kuò)增條帶，共擴(kuò)增出619條譜帶，每對(duì)引物擴(kuò)增帶數(shù)為40～77條，并且各對(duì)引物擴(kuò)增結(jié)果均顯示樣品間存在差異。共得到609條多態(tài)性條帶，多態(tài)位點(diǎn)的比例高達(dá)98.38％。根據(jù)AFLP圖譜計(jì)算了不同樣品間的遺傳距離(D)和相似性系數(shù)(GS)。聚類結(jié)果顯示品系海安與2室間的遺傳相似系數(shù)較高而聚合在一起，不同樣