生物活性氧的熒光表征及新型螺環(huán)型熒光探針的研究.pdf

1、廈門大學(xué)博士學(xué)位論文生物活性氧的熒光表征及新型螺環(huán)型熒光探針的研究姓名：楊小峰申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：分析化學(xué)指導(dǎo)教師：郭祥群2002.8.1摘 要的情況下，體系熒光強度的變他‘凌況一結(jié)果表明，{ E N T E M P O 存在下，反應(yīng)體系的熒光強度在反應(yīng)蔚顯著增加a 這可理解為·O H 作用于D N A 或B S A 分子，導(dǎo)致D N A 或R N A損傷·并產(chǎn)生了某些碳中心自由基類，N T E M P O 撼集

2、碳中心自由基精導(dǎo)致體系熒光信母丹離。因此，盤旋標{ 芒熒光探鐘一方瑟可戳根據(jù)體系熒光信號的升高程度定性地提供生物大分子受損傷程度，另一方面通過進一步分析自旋標記熒光探鐘的撼集產(chǎn)物可推測生物大分子的擐傷機理。?第三章利用F e ( I I ) - E D T A 引發(fā)對苯二甲酸蒡環(huán)羥基化反應(yīng)建立了一種評價抗氧化剎清除·O H 能力的新型熒光分梃法。f 研究·O H 在生物體系中被清除韻梳理是十分重要的，·o

3、H 沒有專一的清除酶，不能通過酶反應(yīng)來消除其生理過程中的毒性。但是一些抗氧劑可以寅效媳漬除·O H ，防止其氧化損傷。本文提出了一秘考察·O H 清除作用的薪型熒光分析法。該方法是利用F 《I I ) 一E D T A 在弱堿性介質(zhì)中還原溶解氧生成超氧陰離子自由基( 0 2 ’·) ，0 2 “·迸一步歧化為H 2 0 2 和氧分子，然后F e ( 1 1 ) - E D T A 和H 2 0 2

4、 反應(yīng)生成·O H 。生成的·O H 讖攻對苯二甲酸生成強熒光產(chǎn)物2 —羥基對苯二甲酸。當(dāng)反應(yīng)體系中存在·O H 豹清除劑時，反應(yīng)過稷中生成的2 ．輕基對苯二甲酸的繁會相應(yīng)減少，利用這種方法可以考察抗氧劑對·O H 的演除效率+ 該方法產(chǎn)生·O H 方法簿單，艨器試剎廉價，考察抗氧烈對·O H 摶清除作粥可在p H7 ．4 韻生理介旗串進行，西詫該方法是一種簡單、快速有效的分析

5、方法。^ 。，一第四章建立了兩種表征O N 0 0 ’的新型熒光分析法。本章分為兩邦分。／第一鄹分年《蹋O N 0 0 “ 的共輟酸O N O O H 均裂生成．N 0 2 和·O H ，然精測定其均袈產(chǎn)物·O H 采間接檢測O N O O H 。具體做法是將O N O O 。在p H 5 ．0 的緩沖液中轉(zhuǎn)化為萁共軛酸O N O O H ，蕊O N O O H 本身不穩(wěn)定，均裂生成·O H ，·

6、O H 進攻慰苯二甲酸生成強熒光產(chǎn)物2 ．羥基對苯二甲酸，利糟熒光分析法涮定2 ．羥驁對笨二甲酸，從而間接確定O N O O ’的含曩。文中對該檢測體系的反應(yīng)動力學(xué)特征、反應(yīng)酸度、熒光檢測黢度、羥基他底甥鮑選擇逃行了研究，勢提出了該雋法鷯檢測梳建。文中介紹了一種利糟疑胺在堿瞧介質(zhì)中的自氧化來稍備O N O O “ 的方法。第二部分利用R B H 作為熒光探針妻接檢測O N O O ’的禽鬃。R B H 本宴為個無色、無熒光的物質(zhì)，O N

7、 O O + 與R B H 反應(yīng)生成強熒光產(chǎn)物羅丹明B ，導(dǎo)致體系的熒光強度大大增強。基于這一原理，我們提出了一種表征O N O O ”的掰型熒光探針。文中對該熒光攆針的 熒光光譜特桎、反應(yīng)動力學(xué)特征等避{ 亍了研究。R B H 檢測O N O O ' ㈣短、靈敏度高，而且該熒光探針本身具有穩(wěn)定性好、激發(fā)波長長( 5 5 6 r i m ) 、反應(yīng)產(chǎn)物的熒光信號對酸度不敏感等優(yōu)點。閡此該方法可望宣接用于生物體系中產(chǎn)生的O N 0