白藜蘆醇腹腔注射后在大鼠體內(nèi)的組織分布及其溶劑相關(guān)性.pdf

1、背景:腹腔化療是一種區(qū)域選擇性化療方法。因其對(duì)腹腔內(nèi)臟器的選擇性且行之有效、操作簡(jiǎn)單，現(xiàn)已廣泛用于結(jié)、直腸癌、肝癌、胃癌和卵巢癌的早期或術(shù)后治療。傳統(tǒng)抗癌藥物在增加患者生存率的同時(shí)，其副作用也嚴(yán)重影響到患者的生存質(zhì)量。因此，找到具有明顯抗癌效果而又副作用小的腹腔化療藥物對(duì)腹腔化療的臨床應(yīng)用意義重大。白藜蘆醇是一種非黃酮多酚類(lèi)化合物，也被稱為芪三酚。1940年首次從白藜蘆的根中提取出來(lái)?，F(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇還存在于花生、葡萄、桑葚、藜蘆、虎

2、杖、決明子、何首烏、鳳梨、谷類(lèi)、朝槐等七十多種植物中。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的白藜蘆醇生物學(xué)活性主要包括抗病毒、神經(jīng)保護(hù)、抗氧化、心血管的保護(hù)、抗炎、植物雌激素、抗腫瘤等作用。在抗腫瘤方面，現(xiàn)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇對(duì)多種高發(fā)性腫瘤有抑制作用，包括淋巴系和髓系腫瘤、多發(fā)性骨髓瘤、乳腺癌、前列腺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、甲狀腺癌、黑色素瘤、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌、卵巢癌和宮頸癌。然而，許多實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示白藜蘆醇體內(nèi)藥物活性并不能達(dá)到體外水平，這表明白黎蘆醇的生物利用度

3、低，血藥濃度及各組織器官的藥物含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于體外實(shí)驗(yàn)的有效濃度，因而在體內(nèi)不足以發(fā)揮與體外實(shí)驗(yàn)相當(dāng)?shù)乃幚砘钚浴Ｎ墨I(xiàn)提供的實(shí)驗(yàn)方法均為將白藜蘆醇溶于一定比例的乙醇溶液后注射，然而實(shí)驗(yàn)室前期研究顯示，白藜蘆醇以10％乙醇為溶劑長(zhǎng)期腹腔注射，藥物會(huì)在腹腔內(nèi)蓄積成不規(guī)則白色斑塊，且對(duì)卵巢癌治療效果不佳。這提示我們，在動(dòng)物體內(nèi)長(zhǎng)期腹腔注射白藜蘆醇，必須使用適當(dāng)?shù)娜軇蛊湓诟骨粌?nèi)吸收迅速、完全，才能提高各組織內(nèi)白藜蘆醇的含量，達(dá)到治療效果。

4、　　目的:通過(guò)白藜蘆醇持續(xù)腹腔給藥分析:1)不同溶劑（10％乙醇和DMSO）對(duì)大鼠體內(nèi)各器官藥物分布的影響。2）10％乙醇為溶劑是否可一定程度上起到緩釋的作用。3）通過(guò)HE染色方法，對(duì)比觀察不同溶劑（10％乙醇和DMSO）給藥組的組織形態(tài)學(xué)變化。通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)，探究白藜蘆醇腹腔注射合適的溶劑并推斷其安全性。
　　方法:從生物樣品中分離、富集白藜蘆醇，并建立有效的高效液相色譜分析方法檢測(cè)其含量。C18色譜柱:5μm，4.6mm×250

5、mm;Nacalai Tesque，Japan。流動(dòng)相:A相20％乙腈（乙酸調(diào)PH為3.5的水配置），B相80％乙腈（乙酸調(diào)PH為3.5的水配置）。梯度洗脫:0min0％B-12min40％B-20min100％B-28min100％B。檢測(cè)波長(zhǎng):303nm。流速:1ml/min。柱溫:30℃。上樣量:15μl。將12只大鼠隨機(jī)分為3組:10％乙醇溶劑組1，DMSO溶劑組1，10％乙醇溶劑組2。大鼠稱重后以20mg/kg的劑量腹腔注射白

6、藜蘆醇，每天一次，連續(xù)注射兩周。DMSO溶劑組注射的白藜蘆醇用DMSO溶解，10％乙醇溶劑組1和10％乙醇溶劑組2注射的白藜蘆醇以10％乙醇為溶劑溶解，白藜蘆醇濃度均為10mg/ml。最后一次給藥后一小時(shí)，10％乙醇溶劑組1和DMSO溶劑組的大鼠脫頸處死，取心、肝、脾、肺、腎、腸，HPLC檢測(cè)其中白藜蘆醇濃度，HE染色觀察其形態(tài)學(xué)變化。10％乙醇溶劑組2的大鼠最后一次給藥后1h觀察白色斑點(diǎn)形成情況并拍照記錄。之后縫合腹腔，肌肉注射青霉素

7、-鏈霉素0.2ml。最后一次給藥后48小時(shí)再次打開(kāi)腹腔拍照記錄，并將心、肝、脾、肺、腎、腸，HPLC檢測(cè)其中白藜蘆醇濃度。
　　結(jié)果:1）DMSO溶劑組中心、肝、脾、肺、腎、腸中白藜蘆醇的濃度是10％乙醇溶劑組1的4.17、2.54、5.93、4.23、2.10、1.91倍。2）10％乙醇溶劑組2的四只大鼠，最后一次給藥后1h，腹腔內(nèi)可觀察到不規(guī)則斑塊，48h后消失。3）10％乙醇溶劑組1的組織和DMSO溶劑組的組織形態(tài)沒(méi)有發(fā)生形