花背蟾蜍胚胎發(fā)育過程中鰓的顯微結構變化及細胞凋亡的研究.pdf

1、兩棲類動物鰓的發(fā)育是一個復雜的過程，包括外鰓期、內鰓期、內鰓退化等階段。本研究以花背蟾蜍發(fā)育過程中的鰓為研究對象，運用石蠟切片、半薄切片、透射電鏡、免疫組化等相關技術，研究了花背蟾蜍鰓的發(fā)生，發(fā)育，退化過程中的形態(tài)結構及細胞凋亡的變化規(guī)律，探論了細胞凋亡與鰓發(fā)育之間的關系。 結果表明花背蟾蜍鰓的發(fā)生是從胚胎發(fā)育第15期鰓原基開始出現(xiàn)，隨著發(fā)育，鰓原基分化出鰓板，鰓板繼續(xù)分化出鰓弓，接著由鰓弓分化出外鰓，到胚胎發(fā)育20期形成以外鰓

2、為呼吸器官的呼吸系統(tǒng)。外鰓進一步發(fā)育，形成了三排指狀外鰓，到22—23期，達到發(fā)育高峰。到胚胎發(fā)育25期，外鰓被鰓蓋包在鰓蓋腔里面，內鰓開始形成，同時外鰓開始退化消失。內鰓的發(fā)育是首先由鰓弓上的突起形成鰓葉，其次鰓葉上出現(xiàn)初級突起，隨著進一步發(fā)育出現(xiàn)次級突起和三級突起，直到內鰓發(fā)育最高峰(胚胎發(fā)育的36期)。隨后進入變態(tài)期，內鰓開始退化，首先是三級突起開始萎縮，其次是次級突起和初級突起，最后是鰓弓，直至鰓弓完全消失，變態(tài)完成。

3、電鏡結果表明花背蟾蜍外鰓與內鰓具有相同的呼吸上皮，為扁平狀，上皮細胞質中富含粗面內質網(wǎng)及空泡和線粒體；氣血屏障由由單層上皮細胞，內皮細胞以及二者之間的基底膜構成，隨著個體的發(fā)育，氣血屏障逐漸變薄。 在電鏡下可見外鰓(25期)與內鰓退化時期(37-39期)鰓上的凋亡細胞，鰓細胞凋亡的形態(tài)學改變表現(xiàn)為：細胞體積明顯縮小，形狀改變；細胞胞質空泡化十分顯著，胞漿濃縮，胞質減少，細胞質電子密度大，呈深色；胞質內細胞器結構模糊不清，數(shù)目明顯

4、減少或消失；細胞核凝集，染色質固縮，積聚成致密塊，并伴有“凋亡小體”出現(xiàn)。但凋亡細胞出現(xiàn)機率最多的是外鰓與內鰓退化時期，即發(fā)育過程中的25期與37、38、39期。 TUNEL免疫組化結果表明花背蟾蜍胚胎發(fā)育以下階段都存在細胞陽性反應，但反應程度不同，23、24、27、31、35、36期有少量的細胞呈陽性，而在25、37、38期有大量的細胞呈陽性。表明在花背蟾蜍胚胎鰓的整個發(fā)育過程中都存在著細胞凋亡，但只有在外鰓和內鰓退化階段出現(xiàn)