遼寧地區(qū)漢族人群D17S518基因座多態(tài)性及其毛發(fā)檢材的應(yīng)用研究.pdf

1、短串聯(lián)重復(fù)序列(short tandem repeats，STR)又稱微衛(wèi)星DNA(mierosatellite)，是指重復(fù)單位只有1～6bp、重復(fù)次數(shù)一般在數(shù)次至幾十次之間的串聯(lián)重復(fù)DNA序列。STR在人類基因組中分布廣泛、數(shù)量較多、等位基因片段長度較短、擴(kuò)增成功率高，是目前法醫(yī)物證鑒定中應(yīng)用最廣泛的DNA長度多態(tài)性遺傳標(biāo)記。 然而，對(duì)于毛發(fā)等富含角化細(xì)胞的特殊法醫(yī)物證檢材，由于其細(xì)胞核發(fā)生明顯的轉(zhuǎn)移，核基因組DNA含量少且分

2、解嚴(yán)重，常規(guī)方法檢測(cè)法醫(yī)物證鑒定中最常用的四核苷酸STR基因座時(shí)，常難以獲得滿意的結(jié)果。線粒體DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)檢測(cè)作為法醫(yī)學(xué)應(yīng)用序列多態(tài)性分析進(jìn)行個(gè)人識(shí)別的典型實(shí)例，在毛發(fā)等非常規(guī)檢材的鑒定中具有重要的實(shí)用價(jià)值。但mtDNA特殊的遺傳特征、突變率較高、信息量較低、檢測(cè)技術(shù)復(fù)雜等因素的影響，在一定程度上限制了mtDNA的法醫(yī)學(xué)應(yīng)用。因此，選擇多態(tài)性程度較高且等位基因片段更短，適用于毛發(fā)等檢材DNA多

3、態(tài)性分析的遺傳標(biāo)記，是法醫(yī)物證工作者共同關(guān)心的課題。 D17S518基因座位于人類第17號(hào)染色體上，是由(CA)n核心序列構(gòu)成的二核苷酸簡(jiǎn)單串聯(lián)重復(fù)序列。本研究首先應(yīng)用PCR擴(kuò)增結(jié)合聚丙烯酰胺凝膠電泳分離的方法，調(diào)查D17S518基因座在遼寧漢族人群中的頻率分布，以評(píng)估該遺傳標(biāo)記的法醫(yī)學(xué)應(yīng)用價(jià)值，并對(duì)其應(yīng)用于毛發(fā)檢材的可行性及影響因素進(jìn)行了初步研究，為該基因座在更廣泛領(lǐng)域的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。 材料與方法： 根據(jù)文獻(xiàn)

4、合成特異性擴(kuò)增D17S518基因座的引物，應(yīng)用PCR技術(shù)和聚丙烯酰胺凝膠電泳分離結(jié)合銀染顯譜的方法，對(duì)120例中國遼寧地區(qū)無血緣關(guān)系的漢族個(gè)體血液樣本進(jìn)行D17S518基因座分型，并通過DNA序列分析確定其等位基因；對(duì)采用不同方法(酚/氯仿法和Chelex-100法)提取DNA，不同數(shù)量(1根、2根和5根)和不同區(qū)段(遠(yuǎn)段、中段和近段)毛發(fā)檢材的D17S518基因座擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行比較。 結(jié)果： 在120例中國遼寧地區(qū)無血緣

5、關(guān)系漢族個(gè)體中，檢出D17S518基因座的5種等位基因及12個(gè)基因型，根據(jù)DNA序列分析結(jié)果將擴(kuò)增片段長度為88bp、90bp、94 bp、98 bp、100 bp的5種等位基因分別命名為D17S518*15、D17S518*16、D17S518*18、D17S518*20和D17S518*21。12種基因型及頻率分別為： 15/15為12例(10％)，16/16為13例(10.7％)，18/18為3例(2.5％)，15/16為21例(

6、17.5％)，15/18為23例(19.2％)，15/20為6例(5％)，15/21為2例(1.7％)，16/18為20例(16.7％)，16/20為8例(6.7％)，16/21為5例(4.2％)，18/20為4例(3.3％)，18/21為3例(2.5％)；5種等位基因頻率分別為：D17S518*15=0.317、D17S518*16=0.333、D17S518*18=0.233、D17S518*20=0.075、D17S518*21=

7、0.042。應(yīng)用Powerstatsv12軟件對(duì)D17S518基因座群體調(diào)查結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，獲得如下法醫(yī)學(xué)應(yīng)用參數(shù)：雜合度(H)為0.767，個(gè)人識(shí)別幾率(DP)為0.872，偶合幾率(Pm)為0.128，非父排除率(PE)為0.539，多態(tài)信息含量(PIC)為0.68。 6個(gè)個(gè)體毛發(fā)檢材的D17S518基因座擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)結(jié)果：①采用酚/氯仿方法提取模板DNA，其擴(kuò)增產(chǎn)物檢出率隨毛發(fā)數(shù)量的增加而提高，即1根為2/6、2根為4/

8、6、5根為5/6；而采用Chelex-100法提取模板DNA的毛發(fā)檢材均未檢出擴(kuò)增產(chǎn)物。②同一毛發(fā)不同區(qū)段的擴(kuò)增產(chǎn)物檢出結(jié)果不同；不同毛發(fā)中、遠(yuǎn)段部分?jǐn)U增產(chǎn)物檢出規(guī)律不同，但近段毛發(fā)均可檢出擴(kuò)增產(chǎn)物。 結(jié)論： 1、D17S518基因座在中國遼寧地區(qū)漢族群體中具有良好的多態(tài)性分布，在法醫(yī)學(xué)上具有較高的應(yīng)用價(jià)值。 2、二核苷酸簡(jiǎn)單串聯(lián)重復(fù)序列的STR基因座適用于毛發(fā)等非常規(guī)法醫(yī)物證檢材的DNA多態(tài)性分析。 3