類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎小鼠模型的制備及刺五加皂苷E對其治療作用的研究.pdf

1、目的：采用皮下注射牛II型膠原蛋白（CII）的方法建立一種有效、實用的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎小鼠模型，并通過觀察小鼠的體重變化、關(guān)節(jié)大體評分、關(guān)節(jié)影像學(xué)評分、血清中抗 II型膠原抗體水平、血清中炎性細(xì)胞因子的水平等指標(biāo)，評價不同劑量組刺五加皂苷E（EE）對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型小鼠的治療效果，并通過研究刺五加皂苷E對巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響來探討其可能的作用機制。
　　方法：①飼養(yǎng)SPF級雄性DBA/1小鼠，7～8周齡，體重18～25g，將牛

2、II型膠原和弗氏完全佐劑混合乳劑在背部經(jīng)皮下注射誘導(dǎo)，三周后將牛 II型膠原和弗氏不完全佐劑混合乳劑在尾根部經(jīng)皮下注射誘導(dǎo)，建立膠原誘導(dǎo)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的小鼠模型。
　?、趯⒛Ｐ托∈箅S機分為5組，對雷公藤（TG）組（15 mg/kg）、低劑量EE組（15 mg/kg）、中劑量EE組（30 mg/kg）、高劑量EE組（60 mg/kg）小鼠進(jìn)行灌胃治療，模型組小鼠給予溶媒灌胃。
　?、蹌討B(tài)觀察不同治療組CIA模型小鼠的癥狀和體征（

3、包括體重、關(guān)節(jié)腫脹程度）、影像學(xué)改變、組織病理學(xué)改變，并且于不同時間點對各組小鼠進(jìn)行采血，測定血清細(xì)胞因子的水平和抗II型膠原抗體的水平。
　?、荏w外培養(yǎng)THP-1細(xì)胞，加入不同劑量的刺五加皂苷E共孵育，檢測細(xì)胞上清中細(xì)胞因子TNF-α、IL-6的水平，討論刺五加皂苷E對細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響。
　　結(jié)果：①用牛II型膠原蛋白免疫DBA/1小鼠誘導(dǎo)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法可靠，發(fā)病時間齊，發(fā)病率高。
　　②與CIA模型組比較，

4、30 mg/kg和60 mg/kg刺五加皂苷E治療組小鼠關(guān)節(jié)炎評分降低，體重減輕的程度減少，后爪腫脹程度也明顯減輕（P<0.01）；15 mg/kg刺五加皂苷 E治療組的小鼠關(guān)節(jié)炎評分和體重減輕的程度以及后爪腫脹度也降低，但統(tǒng)計學(xué)差異不顯著（P>0.05）。
　　③鉬靶 X線光片和 micro-CT檢查發(fā)現(xiàn)：CIA模型組小鼠關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)破壞，關(guān)節(jié)間隙消失，骨質(zhì)表面粗糙；刺五加皂苷E（30 mg/kg和60 mg/kg）治療組中小鼠的骨

5、質(zhì)破壞程度均明顯降低，小鼠骨質(zhì)破壞程度的計分也明顯降低（P<0.01），而刺五加皂苷E（15 mg/kg）治療組并沒有表現(xiàn)出明顯的改善（P>0.05）。
　　④HE染色結(jié)果顯示：CIA模型組小鼠滑膜中有明顯的炎細(xì)胞浸潤、血管翳形成、軟骨破壞和骨侵蝕；刺五加皂苷E（30 mg/kg和60 mg/kg）治療組小鼠滑膜中炎細(xì)胞浸潤程度減輕，血管翳數(shù)量明顯降低，軟骨破壞及骨侵蝕的程度也明顯的被抑制，而刺五加皂苷E（15 mg/kg）治療組

6、變化并不明顯。
　?、菘笽I型膠原抗體水平結(jié)果顯示：CIA模型組小鼠血清中抗II型膠原抗體水平很高；刺五加皂苷E（30 mg/kg和60 mg/kg）治療組小鼠血清中抗II型膠原抗體水平明顯降低（P<0.01）；刺五加皂苷E（15 mg/kg）治療組小鼠血清中抗II型膠原抗體水平也明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）。
　?、藜?xì)胞因子水平結(jié)果顯示：刺五加皂苷E治療組小鼠血清中TNF-α、IL-6和IL-23的水平較C

7、IA模型組明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。IL-17水平雖有所降低，但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。
　?、唧w外實驗結(jié)果表明：刺五加皂苷E對巨噬細(xì)胞無毒副作用，并能抑制巨噬細(xì)胞的活化，使炎性細(xì)胞因子TNF-α和IL-6的分泌減少，且呈時間和劑量的依賴性，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：①牛II型膠原免疫DBA/1小鼠可建立穩(wěn)定的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型。②刺五加皂苷E能夠明顯地改善CIA小鼠關(guān)節(jié)炎的癥