相思根瘤菌質(zhì)粒的研究.pdf

1、本文研究了20株相思根瘤菌株對(duì)5種常見(jiàn)抗生素的抗性，并對(duì)它們的質(zhì)粒分布進(jìn)行了研究。在此基礎(chǔ)上，運(yùn)用接合轉(zhuǎn)移的方法把質(zhì)粒pMC73A從供體菌催娩克斯菌NG13引入受體菌相思根瘤菌MZ和AJ018中，并對(duì)接合子進(jìn)行了結(jié)瘤試驗(yàn)、耐氨試驗(yàn)及固氮酶活性分析。結(jié)果顯示： 1、參試的20株菌株對(duì)抗生素的抗性有明顯的差異。絕大多數(shù)的菌株對(duì)Km、Sm敏感，其中YM2菌株對(duì)所有的抗生素都敏感，而菌株4-2對(duì)所有的抗生素都具有抗性，確定Tc為相思根瘤

2、菌MZ、AJ018抗性篩選標(biāo)記。 2、通過(guò)比較三種質(zhì)粒檢測(cè)的方法，確定了堿裂解法為相思根瘤菌的質(zhì)?？焖贆z測(cè)方法。采用該方法對(duì)20株相思根瘤菌的質(zhì)粒分布進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)相思根瘤菌都只含有一個(gè)質(zhì)粒，而菌株LR005沒(méi)有檢測(cè)到質(zhì)粒。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)質(zhì)粒檢測(cè)的條件進(jìn)行了優(yōu)化，確定相思根瘤菌質(zhì)粒檢測(cè)的菌液量為20ml。 3、運(yùn)用接合轉(zhuǎn)移的方法把質(zhì)粒pMC73A從供體菌催娩克斯菌NG13引入受體菌相思根瘤菌MZ和AJ018中，接合頻率

3、都為10-8數(shù)量級(jí)。對(duì)接合子電泳檢測(cè)表明，MZ接合子能檢測(cè)到質(zhì)粒pMC73A條帶，而AJ018接合子未能檢測(cè)出。接合子的質(zhì)粒穩(wěn)定性研究顯示，質(zhì)粒在宿主菌中具有一定的穩(wěn)定性。 4、對(duì)34株接合子菌株進(jìn)行結(jié)瘤實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，所有的接合子菌株都能在馬占相思的根部形成根瘤。篩選出6株結(jié)瘤能力高于野生型相思根瘤菌的菌株：MZ1、MZ2、MZ4、MZ12、AJ7、AJ9。 5、通過(guò)結(jié)瘤實(shí)驗(yàn)，篩選出了6個(gè)相思根瘤菌接合子，即菌株MZ1

4、、MZ2、MZ4、MZ12、AJ7、AJ9。這6個(gè)相思根瘤菌接合子的耐氨實(shí)驗(yàn)和固氮酶活性研究表明：所有的菌株在(NH4)2SO4濃度為100mmolL-1、300mmolL-1、500mmolL-1的液體培養(yǎng)基中都能較好的生長(zhǎng)，但各菌株在10mmolL-1(NH4)2SO4條件下不能正常固氮，不過(guò)仍具有一定的固氮能力，其固氮酶活性值(nmolml-1h-1)為：MZ1：31.231；MZ2：30.289；MZ4：29.632；MZ12：